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糖尿病是严重威胁人类健康的常见病和多发病,异种胰岛移植是治疗糖尿病极具发展潜力的方法,但免疫排斥反应是影响胰岛移植效果的重要原因之一。异种胰岛移植免疫排斥反应主要由T淋巴细胞介导,T细胞的活化及其效应有赖于MHC2抗原复合体识别及协同刺激信号传递,封闭共刺激通路可诱导受者对供者抗原特异性T细胞无能而产生耐受。细胞毒T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白(CTLA4Ig)是CTLA4分子的胞外段与IgFc段的融合蛋白,可阻断CD28介导的T细胞协同刺激通路,抑制T细胞的活化,从而降低与移植排斥反应有直接关系的白介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)等细胞因子的产生,对移植排斥反应有明显的抑制作用。但全身使用CTLA4Ig或体内基因转染可干扰整体免疫功能并导致非特异性免疫抑制,甚至发生严重并发症,而且需要重复给予,价格昂贵。重组腺相关病毒rAAV具有安全性高、免疫原性低、物理性质稳定、感染细胞谱广等优点,对宿主固有的免疫系统影响小,不会引起严重的急性炎症反应,被认为是最有前途的基因治疗载体之一。 本研究中应用rAAV2携带CTLA4Ig基因体外转染新生猪胰岛,CTLA4Ig基因成功转入了新生猪胰岛,并合成了具有正常功能的CTLA4Ig蛋白,而且转染后的新生猪胰岛形态、活性及生理功能完好。 使用本研究的胰岛储运方法可以有效地防止胰岛运输过程中出现的短时间内温度巨变,以该种方法保存胰岛5小时以内,其形态、功能未见明显改变,有效地减少了储运过程中正常胰岛的丢失,在一定时间内起到了安全、有效转运胰岛的作用。而且此法方法简便,耗资少,易于推广,对于胰岛移植的临床应用有着积极的意义。 新生猪胰岛转染CTLA4Ig基因移植并联合使用免疫抑制治疗,能够产生更好的免疫耐受,更好的保护植入胰岛,实现良好的移植效果;新生猪胰岛转染CTLA4Ig基因后移植有可能一定程度减少免疫抑制剂的使用量,降低免疫抑制剂对于植入胰岛的损伤作用,从而间接地保护胰岛,为提高移植疗效起到促进作用。