手性杀菌剂氟唑菌苯胺对蛋白核小球藻的立体选择性毒性效应与生物富集研究

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截至目前我国市场使用的农药有40%为手性农药,手性农药外消旋体及对映单体在环境中的生物效应存在差异,氟唑菌苯胺是新型手性酰胺类杀菌剂,在水稻等作物上已被广泛登记使用,从对映体水平开展氟唑菌苯胺环境安全评价尤为必要。氟唑菌苯胺及对映单体在水体中的生物效应未见报道,本文以水体环境生物蛋白核小球藻为研究对象,明确氟唑菌苯胺及其对映单体对蛋白核小球藻的立体选择毒性与生物富集差异,通过测定叶绿素含量、揭示了毒性差异的原因,通过代谢组学分析、初步阐明其毒性效应机制,研究结果为氟唑菌苯胺的安全合理使用及评估提供科学依据和技术支撑。主要研究结果如下:1.研究了氟唑菌苯胺及其对映体对蛋白核小球藻的毒性差异。结果表明,氟唑菌苯胺及其对映体对蛋白核小球藻的毒性与暴露时间及暴露浓度成反比,且存在一定立体选择性毒性差异,但不明显,处理96 h,rac-氟唑菌苯胺、S-氟唑菌苯胺和R-氟唑菌苯胺的EC50分别为5.32、5.13和6.11 mg/L,其毒性大小顺序为:S-氟唑菌苯胺>rac-氟唑菌苯胺>R-氟唑菌苯胺。2.通过测定氟唑菌苯胺及其对映体对蛋白核小球藻细胞光合色素含量、揭示了其立体选择性毒性差异的原因。结果表明,随着暴露浓度的增加,蛋白核小球藻中的光合色素含量均发生了不同程度的降低,且暴露浓度越高、细胞光合色素含量差异立体选择性越明显;在低暴露浓度(1 mg/L)时,叶绿素未发生较为明显的含量变化;在中间暴露浓度(3 mg/L)时,经rac-氟唑菌苯胺处理的叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素以及总叶绿素含量约分别降低了23%、22%、21%、32%,经S-氟唑菌苯胺暴露处理的叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素以及总叶绿素含量约分别降低了35%、28%、37%、33%,经R-氟唑菌苯胺暴露处理的叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素以及总叶绿素含量约分别降低了17%、15%、13%、24%。3.探究了氟唑菌苯胺对映体对蛋白核小球藻的立体选择性生物富集。结果发现蛋白核小球藻对氟唑菌苯胺存在一定的立体选择性生物富集作用,且在3d时达到顶峰,R-氟唑菌苯胺被优先富集、最大富集量为30 mg/kg;在未添加小球藻的水体中,氟唑菌苯胺对映体均降解缓慢且无明显差异;在添加蛋白核小球藻的水体中,氟唑菌苯胺对映体均降解较快且存在一定选择性差异,7d时S-氟唑菌苯胺、R-氟唑菌苯胺分别降解了65.8%和82.5%。4.通过代谢组学分析,研究了氟唑菌苯胺对蛋白核小球藻代谢的影响。结果表明,157个差异代谢物中有25个代谢物水平上调、132个代谢物下调;植物次生代谢物的生物合成、嘧啶代谢、ABC转运和癌症中的中心碳代谢均受到显著性影响;L-谷氨酰胺调控体内胞嘧啶,尿嘧啶和胸腺嘧啶下调,影响细胞嘧啶代谢;L-谷氨酰胺和D-果糖1,6-二磷酸等代谢物下调,表明蛋白核小球藻对葡萄糖及谷氨酰胺有着较高的消耗,其代谢途径变化主要体现在中心碳代谢。
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