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恶性黑色素瘤是一种具有高度转移性的恶性肿瘤，全球范围内的黑色素瘤致死率一直居高不下。近年来，随着酪氨酸激酶相关蛋白-2(tyrosinase related protein2, TRP-2)和gp100等黑色素瘤相关抗原研究的日益深入，黑色素瘤DNA疫苗得到了极大的发展。然而，尽管已经在治疗恶性黑色素瘤方面取得了可喜成绩，黑色素瘤DNA疫苗仍然存在着容易引发免疫耐受、诱导的免疫应答微弱等问题亟待解决。TRP-2和gp100在人类黑色素瘤中高度表达，并且在同源的鼠类黑色素瘤中有类似现象。鼠源gp100(mgp100)和鼠源TRP-2(mTRP-2)在小鼠体内容易引发免疫耐受，导致小鼠难以产生有效的保护性免疫应答反应。在本实验中，我们尝试着使用异源黑色素瘤相关抗原来打破这些免疫耐受反应，提高黑色素瘤DNA疫苗的抗肿瘤效果。然而，DNA疫苗本身难以诱导强烈的免疫应答反应，还需要使用适当的佐剂加强其效果。因此，我们选择了基因佐剂Ii-PADRE(invariant Pan DR reactive epitope)和鼠源白介素12(murine interleukin-12, mIL-12)配合我们的黑色素瘤疫苗。此外，癌症患者体内的调节性T (Treg)细胞可能会抑制针对自身肿瘤抗原如gp100和TRP-2的抗肿瘤免疫应答。我们使用地尼白介素(denileukin diftitox, ONTAK)去除Tregs，以便于疫苗更好的发挥功效。我们的实验结果显示，电脉冲法免疫人源gp100(hgp100)和人源TRP-2(hTRP-2)黑色素瘤DNA疫苗(phgp100和phTRP-2)在B16F10肿瘤模型中表现出了显著的保护作用。因此，异源gp100和TRP-2对于打破这些同源抗原引起的免疫耐受是十分必要的；ELISPOT结果显示，phgp100、phTRP-2和pIi-PADRE共同免疫使得抗TRP-2的IFN-γ分泌细胞的数量增加了近2倍，体外抗B16F10细胞的毒性细胞的数量增加了近4倍。而phTRP-2、phgp100和pIi-PADRE(肌肉免疫)结合3次注射pmIL-12(瘤内免疫)免疫的方案治疗效果最佳，该方案免疫小鼠的无瘤生存率达到了75%，且皮下建立的B16F10肿瘤得以有效消退；此外，我们发现疫苗免疫前一天腹腔注射ONTAK去除Treg细胞，结果ONTAK去除Treg细胞后phTRP-2和phgp100的抗肿瘤效果得到了进一步的提升。综上所述，2种异源黑色素瘤DNA疫苗(phgp100和phTRP-2)共同免疫可显著提高机体对B16F10黑色素瘤的保护作用；以ONTAK去除Treg细胞可以进一步增加癌症疫苗效果；而最有效的治疗策略是phgp100和phTRP-2疫苗结合基因佐剂pIi-PADRE和pmIL-12共同免疫。该方案可以在不去除Treg细胞的情况下完全消退建立的B16F10肿瘤，有效的延续小鼠的存活时间并且防止病情复发。