维甲酸诱导肝癌细胞株凋亡及Midkine基因表达的研究

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目的:比较全反式维甲酸(ATRA)的不同剂量对肝癌细胞株HepG-2的疗效,比较两种剂量的全反式维甲酸对肝癌细胞株HepG-2的诱导凋亡的作用,比较两种剂量的全反式维甲酸对肝癌细胞株HepG-2的中期因子(Midkine)的信使核糖核酸(mRNA)并分析二者之间的关系.方法:选择HepG-2肝癌细胞株为研究对象,以10%胎牛血清,1mM的L-谷氨酰胺,100IU/ml青霉素、链霉素的RPMI-1640培养液,5%CO<2>,20%湿度的条件培养肝癌细胞株hepG-2,隔天换液,定期传代分瓶.实验选取细胞活性均在98%以上.以不同浓度的ATRA作用细胞,经MTT比色法检测细胞增殖抑制率,绘制药物量效及时效曲线.以两种浓度的ATRA(高浓度HA:10<-5>M,低浓度LR:10<-6>M)处理细胞,每两天更换同样培养基,在第六天以Annexin-V-FITC双标记法经流式细胞仪(FCM)测定凋亡率.同样方式处理细胞,以逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测MK mRNA的表达变化,采用vilber lour mat no.v01 6456仪器进行数据测定分析.结论:经ATRA处理后的肝脏肿瘤细胞株HEP-G2显示出凋亡趋势,而且较高剂量的ATRA可诱导较高比例的肿瘤细胞凋亡(HA组的早期凋亡率及晚期凋亡率均为LA组的两倍左右).ATRA诱导肝癌细胞凋亡的同时促使肝癌细胞中的MK表达增加,随ATRA的浓度的增高这种表达并未见明显的增强.
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