论文部分内容阅读
为了探究酶解鱼膏和酶解虾膏在水产饲料中的使用效果,减少鱼粉在日粮中的使用量,本文利用酶解海产蛋白复合物饲喂大口黑鲈幼鱼（21.77±0.09g）66天,并对其生长性能、饲料利用效率、鱼体组成以及Pep T1和Taut基因表达等指标进行相应评估,从得出酶解鱼膏和酶解虾膏对大口黑鲈幼鱼的影响,以及在水产饲料中的使用效果。本研究采用2*3双因子实验设计,以酶解鱼膏（FH）与酶解虾膏（HPK）按照干物质基础2:1:1的比例与大豆浓缩蛋白（SPC）和玉米蛋白粉（CGM）组成的复合物替代不同水平（25%、50%、75%）鱼粉,共制得7种等氮等能的膨化饲料,依此记为Control、FH25、FH50、FH75、HPK25、HPK50以及HPK75,其中Control为鱼粉对照组（含32%鱼粉）。养殖实验在室内循环水系统中进行。酶解鱼膏和酶解虾膏对大口黑鲈（Micropterus salmoides）幼鱼摄食、生长、全鱼体组成以及饲料利用效率的影响不同酶解蛋白来源和替代水平对大口黑鲈幼鱼摄食、生长性能、饲料利用率、形体指标、全鱼组成以及营养素的表观消化率影响的结果显示:酶解鱼膏（FH）复合物替代不同水平鱼粉对大口黑鲈幼鱼的FI、WGR、SGR无显著影响（P＞0.05）;对HSI、VSI、CSI以及CF无显著影响（P＞0.05）;对TF、GE以及必需氨基酸中的Cys、Met和Thr的表观消化率无显著影响（P＞0.05）;对全鱼组成中的水分、CP、CF以及PRE和ERE均无显著影响（P＞0.05）;但是与Control组相比,FH75的FCR显著升高（P＜0.05）,而FH25和FH50与Control组无显著差异（P＞0.05）;CP、∑AA和∑EAA和各必需氨基酸（除Cys、Met和Thr）的表观消化率随着替代水平的升高而显著提高,（P＜0.05）,且在FH75组其表观消化率达到最高;灰分在全鱼组成种的含量呈现降低的趋势,在FH25组其含量最高,在FH75组最低,但FH25、FH50与Control组之间无显著差异（P＞0.05）。而酶解虾膏（HPK）复合物替代不同水平鱼粉对大口黑鲈幼鱼的HSI、VSI以及CSI无显著影响（P＞0.05）;对CP、TF、GE以及∑AA和∑EAA的表观消化率无显著影响（P＞0.05）;以及对全鱼组成中的水分以及ERE与可消化水平上的PRE和ERE无显著影响（P＞0.05）;但是酶解虾膏（HPK）对大口黑鲈幼鱼的FI、WGR、SGR以及FCR存在显著影响（P＜0.05）,其中FI、WGR以及SGR会随着酶解虾膏添加水平的升高而降低,而FCR随着不同替代水平升高而提高;形体指标中的CF随着酶解虾膏添加水平的提高而降低;与Control组相比,在FH25组其全鱼组成中CP、CF和灰分含量以及PRE显著提高（P＜0.05）,而HPK50和HPK75则与Control组无显著差异（P＞0.05）。总而言之,酶解鱼膏和酶解虾膏都是可替代鱼粉的优质蛋白源,在一定程度上,12%酶解鱼膏（干物质基础）合适量的植物蛋白可成功替代75%优质鱼粉,使鱼粉的使用量由32%降至8%左右,以及4%酶解虾膏（干物质基础）配合适量的植物蛋白可成功替代25%优质鱼粉,使鱼粉使用量由32%将至24%。酶解鱼膏与酶解虾膏对大口黑鲈（Micropterus salmoides）幼鱼Pep T1 m RNA基因表达的影响在本研究中采用RACE技术对大口黑鲈的小肽转运蛋白Pep T1 c DNA序列进行了克隆,并对其氨基酸序列和蛋白质结构进行预测,同时利用实时荧光定量PCR技术检测Pep T1在大口黑鲈幼鱼各组织间的差异性表达,以及不同酶解复合物替代不同水平鱼粉对大口黑鲈幼鱼前肠中Pep T1基因表达水平的影响。预测结果显示:大口黑鲈的小肽转运蛋白Pep T1 CDS序列全长2205 bp,编码了734个氨基酸,该膜蛋白具有11个跨膜螺旋结构,且蛋白质序列相对保守,与高体鰤（Seriola dumerili）、条纹鲈（Morone saxatilis）和黄金鲈（Perca flavescens）的相似度分别达到了85.15%、85.09%和84.60%,而与哺乳动物和鸟类的同源性为60.0%-63.0%。Pept1组织差异性表达的结果显示:Pep T1在大口黑鲈幼鱼的幽门盲囊和前肠中表达丰度最高,在肌肉中有中等强度的表达,而在肾脏和肝脏中表达微弱。不同饲料组对Pep T1表达水平影响的结果显示:添加适量的酶解物可显著上调前肠中Pep T1基因的表达水平（P＜0.05）,其中FH25和HPK50在各处理组间的表达水平最高,Pep T1基因表达被显著上调（P＜0.05）,而在FH75中Pep T1被显著下调（P＜0.05）,其他处理组与Control组无显著差异（P＞0.05）。总之,添加4%酶解鱼膏或8%酶解虾膏可有效提高Pep T1的表达水平,有利于增强蛋白质的吸收利用。酶解鱼膏与酶解虾膏对大口黑鲈（Micropterus salmoides）幼鱼牛磺酸转运载体（Taut）基因表达及胆汁酸合成的影响本研究利用RACE技术成功从大口黑鲈肝脏中克隆得到了牛磺酸转运载体Taut c DNA序列全长,并对该序列进行预测,预测结果显示:大口黑鲈的牛磺酸转运载体Taut CDS序列全长1878bp,编码了625个氨基酸,该膜蛋白具有12个跨膜结构域,而且在蛋白质序列中存在4个糖基化位点和3个蛋白激酶C磷酸化位点。同时该蛋白质的序列保守,与硬骨鱼类的氨基酸序列同源性达到90%以上。组织差异性表达的结果显示:Taut基因在大口黑鲈幼鱼各组织间的表达丰度分布为肌肉＞肝脏＞心脏＞肠道＞幽门盲囊＞肾脏,且Taut的基因表达丰度在前中后肠之间无显著差异（P＞0.05）;不同饲料组对Taut影响的结果显示:在前肠中,Taut的表达水平在FH组间呈现出先升后降的趋势,在FH25达到最高表达水平,且显著高于Control组（P＜0.05）,而在FH75组Taut的基因表达受到抑制,显著低于Control组（P＜0.05）;而在HPK组,Taut呈现出增长的趋势,并在HPK75组达到最高表达水平,显著高于Control组（P＜0.05）,而HPK25和HPK50组与Control组的表达水平无显著差异（P＞0.05）;在肝脏中,Taut的基因表达水平在FH组呈递增趋势,而在HPK组则呈现先升后降的趋势,在HPK50组达到最高表达水平,其他各处理组的基因表达均显著高于Control组（P＜0.05）。而CYP7A1的基因相对表达水平在FH组和HPK组均呈现出先增后降的趋势,而且CYP7A1表达水平在FH25和HPK50组中分别达到各组最高。总而言之,添加25%酶解鱼膏或50%酶解虾膏可能有助于提高牛磺酸的吸收效率,增强胆汁酸的合成。综上所述,在酶解海产蛋白与大豆浓缩蛋白、玉米蛋白粉按照干物质基础2:1:1复合的前提下,大口黑鲈幼鱼饲料中可添加16%酶解鱼膏复合物或8%酶解虾膏复合物替代鱼粉,即在8%酶解鱼膏或4%酶解虾膏的使用效果等同于16%或8%的优质鱼粉。