罗非鱼无乳链球菌的生物学特性及其灭活疫苗的研究

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罗非鱼(Tilapia)从上世纪50年代引入我国,经过几十年的发展,我国罗非鱼养殖产量已占全球50%,加工出口量跃居世界榜首。自2008年开始我国多个罗非鱼主养区频发罗非鱼暴发性传染病,使当地养殖业遭受巨大的经济损失,成为限制罗非鱼产业发展的一大瓶颈。而目前对该病防治方法主要采用抗生素,但是存在效果差、耐药性、药物残留以及环境污染等诸多问题,进而成为出口贸易的绿色壁垒。因而,迫切需要探索安全高效的防治措施以促进罗非鱼养殖产业的可持续健康发展。  本研究前期开展了该病病原学研究,从海南省文昌市采集具有典型症状的罗非鱼分离到1株细菌HNLFYL4,通过回感试验成功复制暴发性传染病症状。同时,利用分子生物学等方法鉴定该菌为无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)。本试验以HNLFYL4为典型菌株,开展罗非鱼无乳链球菌相关生物学特性的研究,明确该菌株具β溶血,其外毒素的最佳产生条件为THB培养基上28℃静置培养48h;特性研究表明该溶血素能溶解多种动物的红细胞,在-20℃保存较稳定,对热非常敏感。  为了探明细菌及其外毒素的致病力,制备HNLFYL4全菌液、胞外产物(ECP)及菌体对ICR小白鼠和不同规格罗非鱼开展致病性试验,结果表明,HNLFYL4全菌液对小鼠的致病力远远强于罗非鱼,其LD50为1×104 CFU/ml;而不同规格的罗非鱼其致病力相近,同时佐证了外毒素的致病力。  以HNLFYL4为疫苗菌株,建立最佳发酵参数,研制了3类灭活疫苗,分别为灭活全菌疫苗(FKC)、胞外产物灭活疫苗(ECP)及二者的混合二联苗(FKC+ECP),并从免疫保护力和血清抗体效价2个方面评价了无乳链球菌疫苗的免疫效果,结果显示注射组的FKC、ECP和FKC+ECP三组对同源菌株的相对免疫保护率分别为83.3%、40%和90%;浸泡组的FKC、ECP和FKC+ECP三组对同源菌株的相对免疫保护率分别为72.2%、30%和80%; FKC+ECP组显著高于其他组。证实了FKC和FKC+ECP这2类疫苗对罗非鱼均具有较好的免疫保护性,胞外产物本身具有交叉保护效果,可辅助全菌刺激产生更高水平的免疫应答,有效提高了罗非鱼对无乳链球菌的免疫力,为该病的防治提供了技术支撑。
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