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背景和目的特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis，IPF)是一种起病隐袭、病程短、死亡率高的疾病，由于过去医疗条件的限制，很少有学者对该病作深入的研究。但是近年来，随着人类与化学物质接触增多以及环境污染的加剧，IPF患者正在逐年增多。为此，研究人员希望通过分子生物学研究方面的进展，对IPF的发病机制和可能的治疗方法取得突破，以利疾病的早期诊断及治疗。在研究中人们发现，过去认为炎性反应是导致IPF细胞损伤和纤维化的主要原因，但是这一观点已经被证实与临床和基础研究结果不符，而细胞凋亡及其信号调节在间质性肺疾病发病机制中的作用成为新的研究热点。其中Fas(Apo-1／CD95)／Fas配体(Fas ligand，FasL／CD178)系统介导的死亡受体途径及p53在IPF中的表达及调节作用近年来备受关注。Fas／FasL相互结合后通过激活内源性DNA内切酶而诱导的细胞凋亡现象，是导致细胞凋亡的主要途径之一。p53是一个发挥“细胞周期检查点”作用的关键因子，在细胞DNA损伤后使细胞周期阻滞于G1期以利于DNA修补，若DNA不可修复则介导凋亡。因此，p53是目前研究较为广泛的凋亡相关因子。目前对Fas／FasL系统在IPF患者肺组织中表达的研究较少，而且IPF中细胞凋亡、Fas／FasL系统与P53蛋白表达关系的研究国内尚无报道。本课题研究目的旨在：①检测肺泡／支气管上皮细胞凋亡的表达，探讨细胞凋亡在IPF发病中的地位、作用机制。②检测肺泡／支气管上皮细胞P53／Fas／FasL蛋白及Fas／FasL mRNA表达，并评价这些指标与细胞凋亡的相关性，探讨IPF中这些指标表达与细胞凋亡的关系，推测其临床应用价值。③评价P53与Fas／FasL蛋白表达的相关性，了解IPF中介导细胞凋亡的两条途径之间的关系。因此，本文分别采用末端原位杂交(terminal deoxynucleotide transferase-mediated deoxyuridine triphosphate-biotin nick end-Labeling，TUNEL)、免疫组化、原位杂交法检测了IPF患者肺组织肺泡／支气管上皮细胞中的细胞凋亡、Fas／FasL、P53蛋白和Fas／FasL mRNA的表达及其相互关系，旨在探讨这些因素在IPF发病机制中的作用，以期为IPF的临床诊断和治疗提供新的理论基础。资料与方法IPF组12例标本来自我院胸外科行开胸肺活检的IPF患者，其中男性10例、女性2例。所有患者术前均经临床、肺功能、血气分析、X线胸片、高分辨CT检查并诊断为IPF；诊断符合美国胸科协会／欧洲呼吸协会制定的特发性肺纤维化诊断标准，术后病理证实为寻常型间质性肺炎。对照组10例为郑州大学一附院胸外科因肺内孤立癌结节行肺叶切除术的患者，所取组织距癌肿至少5cm，病理诊断为正常肺组织。其中男6例、女4例。所有标本均用10％甲醛溶液固定，然后脱水、石蜡包埋。制成4μm的切片，贴于经APES防脱处理的玻片上。分别应用苏木素—伊红染色、TUNEL、原位杂交和免疫组化法处理标本，进行肺泡／支气管上皮细胞凋亡、P53／Fas／FasL蛋白、Fas／FasL mRNA表达的检测。结果采用SPSS10.0统计分析软件处理，细胞凋亡百分率、P53／Fas／FasL蛋白、Fas／FasL mRNA阳性率的比较及相关分析采用秩和检验及Spearman等级相关方法，α=0.05为检验学水准。结果1、IPF组肺泡／支气管上皮细胞凋亡百分率100.0％(表达阳性标本量／总标本量～12／12)，高于对照组的0.0％(0／10)，差异有统计学意义(U=0.000，P＜0.01)。2、IPF组肺组织中肺泡／支气管上皮细胞Fas mRNA阳性表达率100.0％(12／12)，明显高于对照组的30.0％(3／10)(U=5.500、12.500，P＜0.01)；IPF组肺组织中肺泡／支气管上皮细胞FasL mRNA阳性表达率75.0％(9／12)，在对照组中也有阳性表达90.0％(9／10)，两组间比较差异没有统计学意义(U=51.000，P＞0.05)。3、IPF组肺泡上皮细胞中Fas蛋白表达上调，阳性率100.0％(12／12)，高于对照组的50.0％(5／10)(U=12.0，P＜0.01)；IPF组支气管上皮细胞Fas蛋白表达亦上调，阳性率100.0％(12／12)，高于对照组的60.0％(6／10)(U=24.0，P＜0.01)；IPF组肺泡上皮细胞中FasL蛋白阳性率100.0％(12／12)上调，高于对照组的20.0％(2／10)(U=7.0，P＜0.01)；IPF组支气管上皮细胞FasL蛋白表达阳性率100.0％(12／12)，高于对照组的30.0％(3／10)(U=8.0，P＜0.01)。与正常肺泡／支气管上皮细胞阳性表达率0.0％(0／10)相比，IPF患者P53蛋白表达增强，阳性表达率91.7％(11／12)，差异性显著(U=5.0，P＜0.01)。4、肺泡／支气管上皮细胞凋亡百分率与其P53／Fas／FasL蛋白、Fas mRA表达呈正相关(r_s=0.625～0.839，P＜0.01)；与FasL mRNA之间无明显相关(r_s=-0.078～-0.033，P＞0.05)。肺泡／支气管上皮细胞P53与Fas／FasL蛋白呈正相关(r_s=0.571～0.760，P＜0.01)。结论1、与对照组相比，IPF组中肺泡／支气管上皮细胞凋亡明显增多，这一改变可能与肺组织的纤维化形成有关，是IPF发病机制的主要因素之一。其相关的细胞信号调节途径有望成为IPF诊断和治疗的新靶点。2、Fas／FasL／P53蛋白、Fas mRNA在IPF肺泡／支气管上皮细胞高表达，与其细胞凋亡百分率呈正相关，可能引起上皮凋亡及继发的纤维增生。3、Fas／FasL与P53蛋白表达呈正相关，表明在IPF发病机制中Fas／FasL和p53共同作用于肺泡／支气管上皮细胞，使其凋亡上调。