荷叶药用成分提取及其电子束辐射效应研究

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荷叶中含有荷叶碱、多糖、黄酮等多种生物活性物质,其提取物具有抗氧化、降脂减肥、抗癌、抑菌、镇静催眠、免疫刺激、抗骨质疏松等药理作用。作为食品及中药原料,荷叶的加工工艺研究尚不充分,存在有效成分提取率低、成本高、污染环境等问题,限制了荷叶药用价值的开发和利用。电子束辐射加工技术由于具有常温、清洁、易控制等优势,在中药材的灭菌、保鲜、有效成分提取、减少农残等领域有着越来越多的应用。探索荷叶原粉的电子束辐射效应,对促进荷叶资源的综合利用、扩展电子束辐射加工技术的应用范围、优化荷叶加工工艺、提高荷叶的药用价值具有重要意义。为此,论文研究了电子束辐射在荷叶原粉灭菌、荷叶粗多糖提取、荷叶大分子多糖降解等方面的应用。具体结果如下:1.在荷叶原粉(LLRP)的电子束辐射灭菌工艺研究中,分析了电子束辐射对LLRP有效成分含量、抗氧化活性及HPLC指纹图谱的影响。采用平板菌落计数法检测了样品中微生物数量,采用HPLC分析了不同样品中荷叶碱和芦丁的含量及HPLC指纹图谱的变化,以DPPH自由基清除率和超氧自由基清除率实验分析了样品的抗氧化活性。结果显示,相比于对照品,当LLRP的电子束辐射吸收剂量为15 k Gy时,需氧菌数量降为原来的1/(1.9?10~7),当LLRP的电子束辐射吸收剂量为5 k Gy时,霉菌和酵母菌总数减为原来的1/(1.4?10~4)。辐射前后荷叶碱和芦丁含量无明显变化(P>0.05)。在样品吸收剂量在5~30 k Gy剂量范围内,与对照品相比,没有产生新物质。吸收不同辐射剂量样品的DPPH自由基清除率和超氧自由基清除率较对照品无显著变化(P>0.05)。当电子束的辐射剂量大于15 k Gy小于30 k Gy时,可用于LLRP的灭菌过程,且在此条件下不影响LLRP的品质特性。2.在电子束辐射对荷叶粗多糖提取的影响研究中,考察了电子束辐射对荷叶粗多糖(LLCP)提取率的影响,并将电子束辐射提取与热水提取、超声提取等所得LLCP进行了成分、结构对比研究,对辐射提取机制进行了初步探索。将荷叶原粉在纯水体系下利用电子加速器吸收0~240 k Gy的电子束辐射,经过滤、浓缩、醇沉、纯化得到荷叶粗多糖(LLCP-R),采用热水提取法得到荷叶粗多糖(LLCP-W),采用超声提取法得到荷叶粗多糖(LLCP-U)。以不同辐射剂量所得LLCP-R的质量考察电子束辐射对LLCP提取率的影响。采用硫酸苯酚法测定不同LLCP中的糖含量。采用红外光谱分析不同LLCP结构。通过观察辐射提取所得荷叶提取滤渣的外观形态,探究电子束辐射提取的机理。结果显示,LLCP-R的提取率与电子束辐射剂量成正相关,当辐射剂量为240 k Gy时,LLCP-R提取率显著高于LLCP-W、LLCP-U。LLCP-R中糖含量高于LLCP-U,但显著低于LLCP-W。不同方法所提粗多糖的红外吸收光谱无明显差异。扫描电子显微镜结果显示,在水溶液环境中,电子束辐射破坏了荷叶细胞壁及植物纤维的结构。3.在电子束辐射对荷叶大分子多糖结构及其抗氧化活性的影响研究中,从荷叶中提取分离出一种大分子多糖LLP-20(分子量为2.51?10~6 Da),采用电子加速器对LLP-20的水溶液进行辐射降解处理,利用GPC对降解后的多糖进行分子量测定,使用SEM观察降解前后多糖的形态变化,以DPPH自由基清除率实验及超氧自由基清除率实验探究荷叶多糖辐射降解前后抗氧化活性的变化。结果显示,LLP-20经电子束辐射后,分子量逐渐下降,并呈剂量依赖性,当辐射剂量为60 k Gy时,LLP-20的分子量由2.51?10~6 Da下降至3.1?10~5 Da。红外光谱表明,电子束辐射使LLP-20糖苷键发生断裂,其他结构并无影响。扫描电子显微镜结果显示,LLP-20经电子束辐射后结构松散。抗氧化活性分析结果表明,LLP-20辐射降解后抗氧化活性增强。以上研究表明,电子束辐射是一种安全、有效的获得无菌荷叶原粉的方法。电子束辐射通过对荷叶细胞壁和纤维的降解提高了荷叶粗多糖的提取率。电子束辐射可以有效降低荷叶大分子多糖的分子量从而提高其抗氧化活性。
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