【摘 要】
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目的:本文旨在研究K-H型剪接调控蛋白（KH-type splicing regulatory protein,KSRP）对人肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）HepG2细胞增殖、周期以及凋亡的影响。方法:1.使用Gene Expression Omnibus（GEO）数据库分析HCC患者的肿瘤组织及其对应癌旁组织中KSRP的表达水平;2.使用慢病毒敲低或过表达K
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目的:本文旨在研究K-H型剪接调控蛋白（KH-type splicing regulatory protein,KSRP）对人肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）HepG2细胞增殖、周期以及凋亡的影响。方法:1.使用Gene Expression Omnibus（GEO）数据库分析HCC患者的肿瘤组织及其对应癌旁组织中KSRP的表达水平;2.使用慢病毒敲低或过表达KSRP,通过嘌呤霉素筛选敲低或过表达KSRP的稳定表达HepG2细胞系,随后通过Western blot分别检测HepG2对照组、过表达组及敲低组中KSRP蛋白的表达水平,验证过表达和敲低KSRP的效果;3.采用CCK-8法分别检测24h、48h、72h和96h时KSRP过表达组或敲低组及其阴性对照组的HepG2细胞增值率;4.使用Trizol法提取HepG2细胞中的RNA,通过RNA-seq检测sh KSRP与对照组差异表达的细胞增殖相关基因;5.采取流式细胞术检测sh KSRP以及对照组的HepG2细胞周期分布的变化;6.采用Annexin V-FITC/PI双染法检测sh KSRP以及对照组的HepG2细胞凋亡情况。结果:1.HCC患者中癌组织KSRP表达较癌旁组织升高（P＜0.001）;2.CCK-8检测结果表明,敲低KSRP的HepG2细胞增殖明显减慢（P＜0.01）。3.RNA-seq显示,KSRP敲低后可抑制Marker Of Proliferation Ki-67（MKI67）基因的表达（P＜0.05）。4.流式细胞术的检测结果表明在敲低KSRP之后,HepG2细胞被阻滞在细胞周期的S期,且细胞凋亡量增加,其细胞的凋亡率差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论:敲低KSRP可以将HepG2细胞阻滞在细胞周期的S期,并抑制细胞增殖和促进凋亡,这可能和下调增殖相关基因MKI67的表达相关。
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