白斑综合症病毒(WSSV)是危害虾类养殖的主要病原体,给对虾养殖业造成巨大的经济损失。目前尚无有效的办法处理这种病毒。Rab蛋白是小G蛋白超家族中主要的亚家族成员,通过调节GTP-GDP的循环打开或关闭某些途径以执行其生理功能。研究表明Rab蛋白可能参与宿主细胞抵御外界病原体感染的过程。本文研究了日本对虾Rab9基因在抗WSSV感染中的作用机制。首先克隆表达Rab9基因,通过序列比对发现Rab9基因在不同物种间具有高保守性。实时荧光定量PCR和Western-blot检测表明Rab9在对虾的各个组织中均有转录和翻译,其中在血淋巴细胞和鳃丝组织中表达较高,而在心脏、肌肉、肠、肝脏和其他组织中相对较低。在对虾感染WSSV后,Rab9表达上调,并在36 h达到峰值。通过si RNA抑制Rab9的表达后,WSSV病毒的拷贝数明显增加。这些实验结果表明在对虾体内Rab9起抗病毒的作用。自噬是细胞必不可少的稳态过程,其在免疫反应和炎症过程中发挥着重要作用,在对虾中WSSV利用自噬感染对虾。实时荧光定量PCR和Western-blot结果表明,随着雷帕霉素诱导时间的增加,LC3-II/I比值显著增大,Rab9的m RNA表达水平也随自噬诱导时间的增长而增加,表明Rab9参与了对虾的自噬过程。而当Rab9被沉默后,12 h内自噬水平迅速增强,之后的24 h和36 h的自噬水平也较对照组增强,表明Rab9被沉默后对自噬过程起到了正调控作用,促使自噬水平增强。由此可以推断Rab9可能通过抑制自噬进而抗病毒感染。miRNA是一类长度约20-24个核苷酸的内源非编码小RNA。大部分miRNAs通过第2-8个碱基序列与靶m RNA的3’UTR区结合进而调控基因表达。研究表明miRNA在生物抗病毒感染中具有重要调控作用。本文在筛选获得以Rab9为靶基因的miR-190基础上,明确miR-190的表达分布及其通过抑制Rab9基因表达而增强WSSV对日本对虾的感染。综上所述,本文描述了日本对虾Rab9基因在抗病毒感染的作用机制。论文结果不仅扩大了对Rab蛋白在无脊椎动物抗病毒中分子作用机制的认识,而且有助于丰富和发展海洋无脊椎动物免疫学研究的内容。对虾miR-190可以靶向Rab9的3’UTR,从而抑制Rab9基因表达并增强病毒感染,这为以miR-190为靶标的对虾抗病毒药物设计提供了理论依据。