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本文以研制检测有毒副溶血性弧菌特征DNA序列的电化学生物传感器为目标,研制了三种检测杂交反应的DNA传感器。
首先研究了基于氧化锆薄膜修饰的丝网印刷电极制作的电化学DNA生物传感器。利用氧化锆与5端磷酸基团修饰的副溶血性弧菌单链DNA的作用力将探针固定在丝网印刷电极表面。选用亚甲基兰为电化学氧化还原指示剂,采用循环伏安法和微分脉冲伏安法对DNA固定与杂交过程进行检测。由亚甲基兰的信号差异可以区分该DNA传感器与其互补、完全不互补和单碱基错配序列的杂交情况。同一批6根独立的电极制作的DNA传感器,其峰值电流的相对标准偏差均小于3%。
研究了对氨基苯甲酸修饰的丝网印刷电极。对氨基苯甲酸通过与碳电极生成C-N键固定到电极表面,5端修饰氨基的副溶血性弧菌探针在交联剂EDC和NHS的作用下与对氨基苯甲酸的羧基反应,进而共价固定到电极表面。以亚甲基蓝为指示剂,采用微分脉冲伏安法,该DNA生物传感器可检测杂交前后的电化学信号改变,进而实现溶液中目标DNA的检测。
利用自组装单分子膜法,将5端修饰巯基的副溶血性弧菌探针自组装到金电极表面,使用6-巯基己醇为稀释剂。探讨了自组装单分子膜的成膜条件,得出自组装探针溶液的盐离子浓度为0.1 M,固定时间两个小时。采用线性扫描伏安法,Hoechst 33258为指示剂,该DNA生物传感器可有效区分完全互补、完全不互补和单碱基错配序列,显示此传感器具有较高的选择性。平行实验显示该传感器的重复性较好。