【摘 要】
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目的:研究激活黑皮质素受体-1（Melanocortin receptor-1,MC1R）对脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）诱导小胶质细胞BV2炎症的抑制作用及其相关机制,同时进一步探讨其神经保护作用。方法:（1）以LPS（100ng/ml）诱导小胶质细胞BV2炎症建立帕金森病（Parkinson’disease,PD）的炎症模型。细胞分组:（1）正常对照组;（2）模型组:L
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目的:研究激活黑皮质素受体-1（Melanocortin receptor-1,MC1R）对脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）诱导小胶质细胞BV2炎症的抑制作用及其相关机制,同时进一步探讨其神经保护作用。方法:（1）以LPS（100ng/ml）诱导小胶质细胞BV2炎症建立帕金森病（Parkinson’disease,PD）的炎症模型。细胞分组:（1）正常对照组;（2）模型组:LPS（100ng/ml）组;（3）M C1R激动剂BMS-470539（25 umol/L）组;（4）BMS-470539（25 umol/L）+LPS组。（2）细胞活性检测:应用CCK-8法检测MC1R高选择性激动剂BMS-470539、HIF-1α激动剂（DMOG）对BV2细胞、LPS诱导的BV2细胞活性的影响。（3）MC1R激动剂对LPS诱导BV2细胞产生NOD样受体蛋白3（NOD-like receptor protein 3,NLRP3）炎性小体、炎症因子的影响:予MC1R激动剂BMS-470539预处理BV2细胞1小时,再加入LPS干预BV2细胞24小时,应用Western印迹法检测MC1R激动剂对NLRP3、白介素1β（interleukin-1β,IL-1β）蛋白表达水平,griess法检测BV2细胞上清一氧化氮（NO）水平,ELISA检测BV2细胞上清肿瘤坏死因子-α（Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α）、白介素6（interleukin-6,IL-6）水平。（4）共培养:BV2细胞予MC1R受体激动剂BMS-4705391预孵育1小时,再加LPS继续培养BV2细胞24小时,取BV2细胞条件上清液干预PC12细胞24小时,模拟神经元和小胶质细胞共培养体系,应用CCK-8法检测PC12细胞的活力。（5）机制研究:予MC1R激动剂BMS-470539预处理BV2细胞1小时,再加LPS继续处理BV2细胞15min,应用Western印迹法检测MC1R激动剂对核因子-κB（nuclear factor kappa-B,NF-κB）p65、P-NF-κB p65、P-ERK1/2,P-Akt、P-AMPK的影响。细胞免疫荧光检测MC1R激动剂对NF-κB p65入核的影响。予MC1R激动剂BMS-470539预处理BV2细胞1小时,再加入LPS干预BV2细胞24小时,应用Western印迹法检测HIF-1α、NR4A2、NRF2蛋白水平,最后确定HIF-1α激动剂（DMOG）能否逆转MC1R激动剂的抗炎作用。结果:（1）MC1R激动剂BMS-470539（0-50 umol/L）对BV2细胞活力无明显影响,HIF-1α激动剂DMOG（0-2 mmol/L）BV2细胞活力无明显影响。（2）与正常对照组相比,LPS干预使NLRP3、IL-1β、TNF-α、IL-6蛋白表达水平升高;与LPS干预组相比,MC1R受体激动剂BMS-470539可降低NLRP3、IL-1β、NO的表达水平,但是不能降低TNF-α、IL-6的表达。（3）予MC1R激动剂BMS-470539预处理BV2细胞1小时,再加入LPS干预BV2细胞24小时,取各组条件下培养上清干预PC12细胞24h,LPS组细胞活力较正常对照组活力降低,BMS组、BMS+LPS组较正常对照组、LPS组细胞活力升高。（4）与正常对照组相比,LPS干预能促进NF-κB p65入核促进相关基因的转录,MC1R激动剂可部分抑制NF-κB p65入核;LPS干预能升高P-NF-κB p65、P-ERK1/2、P-Akt、HIF-1α蛋白水平,对NR4A2、NRF2总蛋白表达无明显影响;MC1R激动剂则能抑制P-NF-κB p65、P-Akt、P-ERK1/2、HIF-1α的表达,此外还可以促进AMPK的磷酸化,对NR4A2、NRF2蛋白表达无明显影响。HIF-1α激动剂（DMOG）逆转了MC1R激动剂降低NLRP3、NO的效应。结论:（1）MC1R可通过抑制HIF-1α减少NLRP3、NO的释放,从而抑制神经炎症。（2）MC1R抗炎效应还可能与抑制NF-κB、MAPK、Akt以及促进AMPK等经典通路有关。
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