胚泡着床是哺乳动物特有的生殖活动，是决定妊娠成功与否的关键步骤，因而是进行生殖调控的一个重要环节。胚泡着床是一个复杂的生理过程，涉及胚胎与母体子宫间极其复杂而精细的多因素协同作用，包括胚泡的发育、分化，子宫内膜的同步变化，以及子宫内膜与胚泡的相互作用。长期以来，胚泡着床的分子机制一直都是生殖生物学领域的一个研究热点，随着人们对细胞连接、信号转导、免疫调节等研究的不断深入，各类蛋白酶、细胞因子等非激素类分子在胚泡着床中的作用已得到广泛关注。近年来，国内外学者也纷纷运用不同的现代生物学技术，鉴别筛选到许多新的参与胚泡着床过程的非激素类分子，并对它们在着床中的作用机制进行了深入研究，使我们对着床的分子机制有了更全面的了解，但至今仍有许多问题有待于阐明。 以小鼠为动物模型，我们应用cDNA差减杂交方法鉴别筛选着床相关基因，即以孕4.5天小鼠着床部位（其中包括胚泡）cDNA RsaI片段为Tester，用过量的非着床部位和胚泡cDNA RsaI片段为Driver，通过差减杂交，构建差减库。并通过PCR扩增插入片段和Agarose 电泳的方法，进行克隆筛选，最后测序分析。共获得3个新的小鼠EST（EST8，EST60，EST81）并在GenBank登录，登录号分别为：BG797173，BG797174，BG797175。另外还发现了EST73的DNA序列与O(Sullivan等所报道的着床丝氨酸蛋白酶2（ISP2）的开放阅读框中的部分序列完全一致。以标记的目的EST片段为探针进行Northern杂交，结果发现: EST8主要在孕4.5天小鼠子宫着床组织和肝脏中表达; EST60主要在附睾中表达，孕4.5天小鼠子宫着床组织中有微量表达; EST73只在孕期（D4.5）子宫组织中表达,有高度的时空特异性; EST81主要在孕4.5天小鼠子宫着床组织和卵巢中表达。根据EST8、EST73、EST81与GenBank中已知基因序列的同源性，分别设计相<WP=4>应的5(端引物和3(端引物。用PCR扩增获得了这些EST相应的cDNA，将这3个cDNA序列在GenBank中进行BLAST分析,分别将其命名为E4BP4、ISP2、RGS2 cDNA，并在GenBank中登录，登录号分别为AY061760、AF442819、AF432916。已有研究表明ISP2很可能是一种透明带溶解蛋白。为了进一步研究它的生物学功能，需要制备ISP2抗体，但至今未见相关报道。为此我们应用GST表达系统表达融合蛋白GST-ISP2，经酶切回收得到重组ISP2。然后用常规方法免疫家兔，获得ISP2多克隆抗体。Western blot分析时，用1：200稀释的该抗血清为一抗时，仍可在特定的位置显示印迹条带。用该抗血清为一抗进行免疫组化分析，结果发现，ISP2蛋白在孕期第5-8天的着床与非着床部位及假孕小鼠子宫的腺上皮表达，这与文献报道的原位杂交检测ISP2mRNA的分布结果基本一致，更进一步说明该抗体具有专一性。有关ISP2抗体对小鼠胚胎着床影响的体内实验正在进行之中。 我们从 Northern blot分析发现，RGS2主要在孕4.5天小鼠子宫着床组织和卵巢中表达，着床与非着床部位有显著差异。到目前为止，未见RGS2与胚胎着床的相关研究报道。我们应用Northern blot和原位杂交的方法，研究了RGS2在不同时期的子宫组织中的分布。Northern blot表明RGS2在小鼠孕第5天至9天在着床和非着床部位的表达，从第6天到第8天逐渐增强，第9天开始减弱。且见着床部位的表达明显强于非着床组织。原位杂交表明，RGS2 mRNA主要分布在子宫着床部位的蜕膜细胞中。提示RGS2可能通过调节母胎界面Ca2+的流动和T淋巴细胞的增殖，在胚泡着床中发挥作用。 MNSF(是一种具有非特异性抑制免疫反应的淋巴因子。以兔抗MNSF(多克隆抗体为一抗，免疫组化结果表明，MNSF(蛋白表达的部位在小鼠子宫内膜的腔上皮和腺上皮。正常的发情周期有表达，着床后着床部位的表达明显下调。表达不受雌孕激素的调节。