苹果绵蚜属同翅目、瘿绵蚜科,是苹果属果树的重要害虫,也是世界检疫性对象。苹果绵蚜目前在我国分布广泛,对苹果等果业生产构成严重威胁。化学防治一直以来是控制苹果绵蚜的重要手段,随着杀虫剂的大量使用,不可避免地会引起苹果绵蚜抗性的产生。然而,目前有关苹果绵蚜抗性监测的研究鲜有报道。本文通过对三种生测方法进行比较,选择浸叶法为最适合苹果绵蚜的室内生测方法,并利用此法测定了不同种群对常用药剂的抗性水平,同时测定比较了解毒代谢酶活力,克隆获得了吡虫啉的作用靶标--烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)两个亚基cDNA的全长序列,并分析了不同抗性水平的苹果绵蚜种群中这两个基因氨基酸序列的差异,以期为苹果绵蚜的抗性监测与治理提供理论依据。研究结果对于指导各地苹果绵蚜的有效治理,明确其抗性风险及抗性机理具有重要的理论和实际意义。1.苹果绵蚜生测方法比较及抗药性监测为了明确我国苹果绵蚜的抗性现状和分布,通过比较确定苹果绵蚜合适的生测方法并对山东济南、江苏丰县、新疆察布查尔苹果绵蚜进行抗性监测。采用浸叶法、点滴法、药膜法等生测方法测定山东济南苹果绵蚜对毒死蜱、吡虫淋、高效氯氟氰菊酯三种药剂的敏感性,并对三种生测方法进行了分析比较。结果表明三种方法对苹果绵蚜的室内毒力测定结果一致,均为毒死碑、高效氯氟氰菊酯、吡虫淋的毒力依次降低。综合比较各种方法的优缺点,浸叶法由于操作简单,更贴近农田喷药实际情况且结果稳定被选择为苹果绵蚜最适合的生测方法。利用浸叶法于2014-2015年进行抗性测定,以察布查尔2014苹果绵蚜为相对敏感种群,结果发现:对于毒死蜱,济南、察布查尔和丰县种群分别表现为中等水平抗性、低水平抗性和低敏感性;对于高效氯氟氰菊酯,2015年济南、丰县种群均达到高水平抗性,察布查尔种群达到极高水平抗性;对于吡虫淋,2014年、2015年济南种群分别产生了 63.54和63.70倍的抗性,达到高水平抗性;2015年察布查尔和丰县种群抗种群都产生了极高水平的抗性。研究结果表明测试地区的苹果绵蚜对三种药剂产生了不同程度的抗性,尤以对吡虫啉的抗性最为严重,防治中应注意药剂的合理轮用延缓抗性加剧。2.不同苹果绵蚜种群解毒代谢酶活力测定为了进一步阐明苹果绵蚜的抗性生化机理,测定比较了山东济南、江苏丰县、新疆察布查尔和陕西乾县四个地区苹果绵蚜种群的全酯酶活力和谷胱甘肽-S-转移酶活力。结果表明:济南、察布查尔和乾县三个种群的全酯酶活力之间无明显差异,丰县种群的活力却明显低于三者;对于谷耽甘肽-S-转移酶,丰县和察布查尔种群的酶活力显著高于济南种群。结合几个种群的抗性监测结果,推测谷胱甘肽-S-转移酶活力的升高可能是苹果绵蚜对高效氯氟氰菊酯和吡虫淋产生抗性的原因之一。3.苹果绵蚜烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)基因的克隆及点突变分析为了全面揭示苹果绵蚜对吡虫啉的抗性机理,利用PCR和RACE技术克隆苹果绵蚜nAChR亚基基因,获得nAChR α2和nAChR α5亚基cDNA的全长序列,分别命名为Elα2和Elα5。Elα2亚基全长共2064 bp,开放阅读框1758 bp,编码586个氨基酸;Elα5亚基,全长共2072 bp,开放阅读框1638 bp,编码546个氨基酸。这两个基因与已报道的其他昆虫的nAChRs基因具有很高的相似性,均具有nAChRs典型的分子机构特征。分别比较了济南、丰县、察布查尔、乾县和昌黎五个种群的Elα2和Elα5的氨基酸序列结果发现,不同种群间这两个基因存在一系列特定的氨基酸多态性。以期为苹果绵蚜对吡虫啉的靶标抗性机理的深入研究奠定基础。