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间斑寇蛛(L.tredecimguttatus)属球腹蛛科、寇蛛属,是一种中型蜘蛛,是已知世界上毒性最强的蜘蛛之一。早期的文献报道和我们的前期研究结果发现,间斑寇蛛与其他有毒动物不同,不仅毒腺毒液中含有各种毒性成分,其身体的其他组织(如腿、腹部等)以及卵粒中也存在毒性成分。尽管已有零星的关于间斑寇蛛机体组织和卵粒毒性成分研究的文献报道,但到目前为止还没有对间斑寇蛛卵粒毒素成分进行系统分离纯化和结构与功能分析的相关报道。在本研究中,我们采用溶液抽提方式获得卵粒提取物,然后用凝胶过滤层析和反相高效液相色谱(RP-HPLC)的方法对卵粒提取物中的多肽类成分进行了分离纯化,并对纯化产物的理化和生物学性质进行了初步研究。
间斑寇蛛卵粒提取物通过凝胶过滤层析得到7个峰。本研究主要对P7号峰中的成分进行了进一步的分离纯化与鉴定。质谱分析表明, P7主要由分子量小于10 kDa多肽组成,主要多肽成分分布在1807Da至4276Da的范围。应用RP-HPLC对凝胶过滤层析之后得到的P7洗脱峰成分进行进一步的分离纯化得到4个主要的分离峰(命名P7-1至P7-4)。它们的主要多肽成分的分子量(M+H+)分别为4109.79Da、3652.99 Da、3722.28 Da、3651.54Da。MALDI T(O)F质谱分析表明P7-1样品已得到完全纯化,质其多肽分子量(M+H+)为4109.79。运用P7-1成分按0.332 mg/kg体重的剂量进行小鼠腹腔注射没有发现明显的中毒症状。利用离体小鼠隔神经膈肌标本进行的电生理实验证明P7-1成分在100μg/mL浓度下不能阻断小鼠隔标本中的神经-肌肉接头传递。按20μg和40μg/g体重的剂量对美洲蜚蠊进行腹部注射,蜚蠊也没有出现明显的中毒症状。这些实验数据显示,在本研究的剂量下P7-1成分对小鼠和美洲蜚蠊没有明显的毒性。该多肽成分的其他生物学活性还有待进一步研究。