三阴性乳腺癌潜在生物标记物筛选及BUB1B诊疗价值研究

来源 :石河子大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:digitalmachinec
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目的:运用生物信息学方法对多芯片联合分析,筛选三阴性乳腺癌(Triple negative breast cancer,TNBC)核心基因,通过多个数据库对所筛选的核心基因进行生物学功能分析及诊疗价值评估,在组织及细胞层面验证其差异性表达,以期为TNBC的诊断和治疗提供潜在的分子靶点。方法:从GEO数据库中下载TNBC患者数据集GSE65212和GSE53752。基于R语言软件进行批次校正并筛选TNBC的差异表达基因(Differentially expressed genes,DEGs)。对DEGs进行GO及KEGG富集分析。运用STRING数据库构建DEGs的蛋白互作网络并基于Cytoscape软件进行可视化。MCODE和Cyto Hubba插件用于提取蛋白互作网络中重要模块及核心基因。利用K-M Plotter网站及TCGA数据库中TNBC患者相关信息对核心基因的临床价值进行评估。回顾性收集2012年1月至2020年8月在石河子大学医学院第一附属医院病理确诊为TNBC的40例患者标本及40例正常乳房组织样本,利用IHC验证BUB1B的表达水平,并通过蛋白质印迹法(western-blot)检测BUB1B在TNBC细胞系及正常乳腺细胞系中的表达水平。结果:基于“sva”和“limma”包,本研究共获得888个DEGs(上调432个,下调456个)。GO分析表明DEGs主要涉及有丝分裂核分裂、核分裂以及有丝分裂姐妹染色单体分离等生物学过程;分子学功能包含糖胺聚糖结合、肽结合和RAGE受体结合;细胞学组分包括细胞外基质、浓缩染色体以及浓缩核染色体动粒等。KEGG通路分析表明DEGs主要与细胞周期通路有关。通过STRING数据库构建了一个包含820个节点和6900条相互作用连线的PPI网络,基于MCODE和Cyto Hubba插件分别提取了PPI网络中的4个重要模块和9个关键基因。利用K-M Plotter网站对关键基因进行生存分析,结果显示BUB1B、CCNA2和DLGAP5的高表达与患者较短的无远处转移生存期相关(P<0.05)。基于TCGA中的临床病理特征分析显示BUB1B在TNBC组织中的表达高于正常乳腺组织(P<0.05),并且与较差的Stage分期(P<0.05)相关。IHC结果表明BUB1B在TNBC组织中的表达高于正常乳腺组织(P<0.05),并集中表达在细胞质中。Western-blot结果同样表明BUB1B在MDA-MB-231细胞中的表达高于正常乳腺细胞MCF-10A(P<0.05)。结论:1.BUB1B、CCNA2和DLGAP5是与TNBC相关的核心基因。2.BUB1B的高表达与患者较短的无远处转移生存期及较差的Stage分期相关。3.BUB1B在肿瘤组织和高侵袭性细胞系MDA-MB-231中表达上调,该基因可作为TNBC患者潜在诊疗靶标。
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