【摘 要】
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目的:通过建立新生Sprague-Dawley大鼠缺氧缺血性脑损伤（Hypoxic-ischemic brain damage,HIBD）的动物模型,测定HIBD不同时间点脑组织中NLRP1、Caspase-1、IL-18的表达及给予静注人免疫球蛋白（IVIG）干预后对NLRP1-Caspase-1-IL-18通路表达的影响。方法:（1）选择7日龄清洁级SD大鼠96只,随机分成3组,Sham组,H
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目的:通过建立新生Sprague-Dawley大鼠缺氧缺血性脑损伤（Hypoxic-ischemic brain damage,HIBD）的动物模型,测定HIBD不同时间点脑组织中NLRP1、Caspase-1、IL-18的表达及给予静注人免疫球蛋白（IVIG）干预后对NLRP1-Caspase-1-IL-18通路表达的影响。方法:（1）选择7日龄清洁级SD大鼠96只,随机分成3组,Sham组,HI组,IVIG组,每组32只。分4个时间点测量指标,即造模后6h、24h、72h、7d每组每个时间点随机分8只大鼠。（2）HI组及IVIG组采用改良Rice-Vannuncci法,左侧颈总动脉结扎后,92%N2+8%O2缺氧处理2.5 h,创建HIBD动物模型。Sham组仅钝性分离左侧颈总动脉与迷走神经,不给予结扎,不做缺氧处理。IVIG组在造模成功后经腹腔注射IVIG（0.02 ml/g,2次/天,共2天）。Sham组及HI组腹腔注射等量生理盐水作为对照。（3）在造模后6h、24h、72h、7d分别进行心脏灌注固定,脑组织取材。采用HE染色镜下观察新生大鼠脑组织病理学改变及免疫组化测定各时间点脑组织中NLRP1、Caspase-1、IL-18表达水平的变化。结果:1.一般表现:Sham组无意识及行为能力改变,HI组及IVIG组给予缺氧处理10 min左右出现烦躁不安,躁动;30 min左右出现气促、皮肤青紫、抽搐、晃头;1h之后出现精神萎靡,不能翻身。造模后观察大鼠可见前爪难以伸直、夹尾反应、站立不能、四肢抖动及抽搐昏迷等。2.HE染色:镜下观察新生大鼠脑组织病理学改变Sham组:各时间点新生SD大鼠脑组织结构清楚,大脑皮层各细胞分布整齐,形态及数量正常,包膜完整,核仁清晰,无神经细胞变性及坏死表现。HI组:HI后6h可见大脑皮层细胞层数相对减少,细胞排列相对疏松紊乱,周围细胞间隙相对扩大;24h可见大脑皮层局部病灶细胞出现明显空泡、变性及坏死,细胞核固缩、碎裂溶解;72h可见脑组织充血,细胞排列紊乱且胞浆疏松淡染;HI后7d可见大脑皮层胶质细胞增生。IVIG组:各时间点可见神经细胞变性及坏死程度较HI组轻,神经元数量减少不明显,结构尚规则,细胞核固缩及碎屑均较HI组轻。3.免疫组织化学染色结果:Sham组:NLRP1、Caspase-1、IL-18表达较少,各时间点表达无明显变化,经统计学软件分析不具有统计学意义（P>0.05）。HI组:NLRP1、Caspase-1、IL-18于6h开始增高,24h达高峰,之后呈下降趋势,各时间点经统计学软件分析具有统计学意义（P<0.05）,与Sham组各时间点相比（P<0.05）,差异有统计学意义。IVIG组:与Sham组各时间点相比NLRP1、Caspase-1、IL-18表达升高（P<0.05）,有统计学意义;与HI组各时间点比较,NLRP1、Caspase-1、IL-18表达均有下降,差异显著（P<0.05）,有统计学意义。结论:1.新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后,脑组织内NLRP1、Caspase-1、IL-18表达升高,说明NLRP1炎症小体通路可能参与了缺氧缺血性脑损伤发生发展过程。2.IVIG可能通过抑制NLRP1激活,下调Caspase-1、IL-18表达,从而抑制NLRP1炎症小体通路,减轻脑组织炎症反应而发挥脑保护作用。
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