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猪瘟(classicM swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)引起的猪的一种高度接触性、急性传染病,以发热和出血为主要特征。本病具有极强的传染性,可形成大范围流行,造成巨大的经济损失。预防和控制该病的关键措施是高效疫苗和准确的诊断方法。目前用于猪瘟的诊断技术种类很多,传统的ELISA多用于抗体的检测,一般用全病毒作为其包被抗原,存在散毒的危险。猪瘟病原检测是猪瘟病毒感染确诊的金标准,单抗具有特异性高的特点,因此基于单抗而建立的猪瘟病原诊断方法具有重要的应用前景。本研究开展了猪瘟病毒单克隆抗体的制备及其应用的初步研究。
本研究以纯化的CSFV为免疫原,免疫BALB/C小鼠,将脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/O融合,用ELISA法筛选获得1株分泌抗CSFV单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞,命名为2D1,其细胞上清和腹水的效价分别24和100×28,腹水纯化后浓度为2 mg/ml。免疫荧光试验表明该单抗能与猪瘟抗原特异性结合。在此基础上,结合抗CSFV单克隆抗体389建立了双抗体夹心ELISA方法检测猪瘟抗原。该方法特异性强,仅与猪瘟抗原反应,与牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、猪呼吸与繁殖障碍综合征症病毒(PRRSV)、伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)和乙脑病毒(JEV)均不起反应。本研究为进行研制检测猪瘟抗原的诊断方法奠定了基础。