【摘 要】
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目的:探讨E-钙粘蛋白(E-cadherin,E-cad)在内皮祖细胞(Endothelial progenitor cells,EPCs)和间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)之间的粘附作用及机制。方法:1.体外
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目的:探讨E-钙粘蛋白(E-cadherin,E-cad)在内皮祖细胞(Endothelial progenitor cells,EPCs)和间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)之间的粘附作用及机制。方法:1.体外C57BL/6J(WT)小鼠骨髓腔分离培养EPCs和MSCs。2.使用Mito Tracker Red标记EPCs,DAPI标记MSC。3.采用免疫荧光的方法观察E-cad在细胞内的表达情况。4.细胞粘附实验观察EPCs与MSCs体外粘附现象。5.使用E-cad Si-RNA干扰EPCs和MSCs中E-cad的表达。6.RT-PCR和Western-blot检测Si-RNA转染效率。7.转染成功后在成血管的凝胶上进一步检测二者粘附现象。8.ELISA检测E-cadherin的表达。9.RT-PCR和Western-blot检测MSCs和EPCs相互作用后E-cad/β-catenin的m RNA和蛋白表达。10.MSCs和EPCs分别加入β-catenin特异性抑制剂XAV939后,在成血管的凝胶上进一步检测二者粘附现象。结果:1.体外共培养MSCs和EPCs,E-cad的表达显著上调。2.E-cad Si-RNA成功转染MSCs和EPCs,E-cad m RNA和E-cad蛋白的表达显著下调。3.Si-RNA成功转染MSCs和EPCs后,二者粘附现象明显受到抑制。4.沉默EPCs和MSCs的E-cad后,二者在成血管凝胶上的粘附及成管现象均受到显著抑制。5.MSCs和EPCs均能分泌E-钙粘蛋白。6.EPCs分泌的E-cad通过上调MSCs的β-catenin来调节二者共粘附。7.β-catenin信号通路调控MSCs和EPCs的粘附。结论:E-cad通过β-catenin通路介导EPCs和MSCs之间的粘附。
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