【摘 要】
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目的 初步探讨E-钙黏蛋白(E-cad)在内皮祖细胞(EPCs)和间充质干细胞(MSCs)之间的黏附作用.方法 体外C57BL/6J小鼠骨髓腔分离培养EPCs和MSCs,使用Mito Tracker Red标记EPCs,DAPI标记MSCs;采用免疫荧光的方法观察E-cad在细胞内的表达情况;细胞黏附实验观察EPCs与MSCs体外黏附现象;使用E-cad siRNA干扰EPCs和MSCs中E-cad的表达,RT-qPCR和Western blot检测siRNA转染效率;转染成功后在成血管的凝胶上进一步观察
【机 构】
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725000 安康,陕西省安康市中心医院普外科;832000 石河子,新疆石河子大学医学院;725000 安康,陕西省安康市中医医院检验科;832000 石河子,新疆石河子大学医学院
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目的 初步探讨E-钙黏蛋白(E-cad)在内皮祖细胞(EPCs)和间充质干细胞(MSCs)之间的黏附作用.方法 体外C57BL/6J小鼠骨髓腔分离培养EPCs和MSCs,使用Mito Tracker Red标记EPCs,DAPI标记MSCs;采用免疫荧光的方法观察E-cad在细胞内的表达情况;细胞黏附实验观察EPCs与MSCs体外黏附现象;使用E-cad siRNA干扰EPCs和MSCs中E-cad的表达,RT-qPCR和Western blot检测siRNA转染效率;转染成功后在成血管的凝胶上进一步观察二者黏附现象.多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较使用LSD-t检验.结果 (1)与MSCs、EPCs比较,体外共培养MSCs和EPCs上清液中E-cad表达(378.26±34.47、564.72±41.58比1087.28±101.92)升高,差异均具有统计学意义(P<0.05);(2)与Control-siRNA、Mock、Negative相比,E-cad siRNA转染MSCs 48 h后E-cad mRNA表达(0.97±0.07、0.93±0.06、1.00±0.03比0.30±0.05)、E-cad蛋白表达(252.19±11.62、223.70±13.66、257.50±12.08比31.74±4.08)均降低,差异有统计学意义(P<0.05);与Control-siRNA、Mock、Negative比较,E-cad siRNA转染EPCs 48 h后E-cad mRNA表达(0.93±0.07、0.88±0.08、1.00±0.02比0.36±0.07)、E-cad蛋白表达(429.46±31.87、409.13±26.97、436.80±34.69比54.03±15.05)均降低,差异有统计学意义(P<0.05);(3)E-cad siRNA成功转染MSCs和EPCs后,二者黏附现象受到抑制;(4)沉默EPCs和MSCs的E-cad后,二者在成血管凝胶上的黏附及成管现象均受到抑制.结论 E-cad介导EPCs和MSCs之间的黏附.
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