【摘 要】
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肠神经系统作为哺乳动物的“第二大脑”,在调节胃肠道功能方面有着强大的作用。肠道神经元和胶质细胞源自于神经嵴,神经嵴细胞在胚胎期迁移至前肠,然后沿肠壁不断增殖、迁移、分化,最终形成肠道神经系统。肠道神经系统形成包括一系列复杂过程,涉及到许多信号通路,miRNA作为非编码RNA也参与其中。miR-30a-3p属于miR-30a家族一员,被发现在结肠、直肠癌等多种癌症组织中表达量减少,而且它的主要作用是
【基金项目】
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国家自然科学基金（编号:81770514）；
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肠神经系统作为哺乳动物的“第二大脑”,在调节胃肠道功能方面有着强大的作用。肠道神经元和胶质细胞源自于神经嵴,神经嵴细胞在胚胎期迁移至前肠,然后沿肠壁不断增殖、迁移、分化,最终形成肠道神经系统。肠道神经系统形成包括一系列复杂过程,涉及到许多信号通路,miRNA作为非编码RNA也参与其中。miR-30a-3p属于miR-30a家族一员,被发现在结肠、直肠癌等多种癌症组织中表达量减少,而且它的主要作用是抑制细胞增殖和迁移,加速细胞凋亡。已有研究表明miR-30a-3p在神经嵴细胞发育疾病先天性巨结肠中表达异常,但其对肠道神经嵴细胞迁移、增殖等的影响尚未可知。因此,本研究以SH-SY5Y细胞作为肠道神经嵴细胞的模型来研究miR-30a-3p对肠道神经嵴细胞的增殖、迁移和凋亡的作用及其机制。首先通过CCK-8、Ed U、RTqPCR、Western Blot、Transwell技术和流式细胞术来检测转染miR-30a-3p模拟物和抑制剂之后对肠道神经嵴细胞的增殖、迁移、细胞周期和凋亡的影响;再通过Targetscan、MiRdb、MiRBase等网站预测miR-30a-3p的靶基因,然后通过荧光素酶报告试验检测其靶向关系,RT-qPCR检测miR-30a-3p及PTEN的表达量,最终确定靶基因,本研究获得以下结果:1.在SH-SY5Y细胞中转染miR-30a-3p mimic后,过表达miR-30a-3p降低SHSY5Y细胞的增殖活性,增殖相关基因的m RNA转录和蛋白表达降低,且细胞迁移受到抑制,但细胞周期和细胞凋亡无显著影响;转染miR-30a-3p inhibitor后,抑制miR-30a-3p表达会增加SH-SY5Y细胞的增殖活性,且促进细胞迁移。2.荧光素酶报告试验和RT-qPCR试验,证明PTEN基因的3’-UTR区域存在miR-30a-3p结合位点,PTEN的表达受到miR-30a-3p的调控。3.转染siPTEN后,抑制PTEN基因的表达后会促进SH-SY5Y细胞的增殖活性,增殖相关基因的m RNA转录和蛋白表达增加,且促进细胞迁移。4.共转染miR-30a-3p mimic和siPTEN后,会一定程度地抑制siPTEN导致的细胞增殖的促进作用,且会抑制siPTEN导致的细胞迁移的促进效果。综上所述,在肠道神经嵴细胞中,miR-30a-3p抑制细胞增殖和迁移,PTEN也抑制细胞增殖和迁移;miR-30a-3p可以靶向结合PTEN的的3’-UTR区域;miR-30a-3p过表达上调PTEN的表达,从而抑制肠道神经嵴细胞的增殖和迁移。本试验以miR-30a-3p为出发点,探究了其在肠道神经嵴细胞中的作用,并通过与其结合的PTEN基因,探究其调控关系,为进一步阐明miRNA对肠道神经嵴细胞的调控机理提供了理论依据。
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