【摘 要】
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目的采用E.coli（Escherichia coli,大肠杆菌）LPS（Lipopolysaccharide,脂多糖）刺激hDPCs（Human dental pulp cells,人牙髓细胞）并构建牙髓细胞炎症模型,探究人参皂苷Rg1对抗LPS刺激及炎症状态下hDPCs增殖能力、成骨分化及炎症细胞因子表达的影响。方法1.使用完全培养基作为空白对照组,实验组为分别含2.5、5、10μmol/L三
【基金项目】
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福建省科技创新联合资金项目（项目编号:2016Y9024）; 福建省卫生计生委青年科研基金（项目编号:2018-1-66）
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目的采用E.coli（Escherichia coli,大肠杆菌）LPS（Lipopolysaccharide,脂多糖）刺激hDPCs（Human dental pulp cells,人牙髓细胞）并构建牙髓细胞炎症模型,探究人参皂苷Rg1对抗LPS刺激及炎症状态下hDPCs增殖能力、成骨分化及炎症细胞因子表达的影响。方法1.使用完全培养基作为空白对照组,实验组为分别含2.5、5、10μmol/L三种不同浓度的人参皂苷Rg1培养基,培养hDPCs 7天通过CCK-8法检测细胞的增殖情况。2.在含1μg/mL E.coli LPS及上述三种不同浓度人参皂苷Rg1的培养基中培养hDPCs 1、3、5、7天,通过CCK-8法检测细胞的增殖情况。3.实验组为含5μmol/L人参皂苷Rg1和（或）1μg/mL E.coli LPS的成骨诱导培养基,以不含人参皂苷Rg1和LPS的成骨诱导培养基作为对照组,培养hDPCs 7天和14天,通过ALP（Alkaline phosphatase,碱性磷酸酶）染色、ALP活性检测观察细胞ALP的表达情况;培养hDPCs 21天时茜素红染色检测hDPCs钙结节的表达情况。4.以完全培养基作为空白对照组、含1μg/mL E.coli LPS作为对照组,实验组采用LPS预处理hDPCs 3小时后再分别加入上述三种不同浓度的人参皂苷Rg1培养1小时后Real-time PCR检测各组hDPCs炎症细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6的m RNA表达水平;培养24小时后ELISA检测细胞IL-6的蛋白表达水平。结果1.CCK-8法检测结果示,培养细胞第5天时,仅5μmol/L及10μmol/L人参皂苷Rg1组OD值高于对照组;第6天及第7天时,三种浓度的实验组OD值均高于对照组（p<0.0001）。2.人参皂苷Rg1和LPS共同培养细胞第5天时,2.5、5、10μmol/L人参皂苷Rg1+LPS组OD值均高于单纯LPS组;第7天时,仅5μmol/L及10μmol/L人参皂苷Rg1+LPS组OD值高于单纯LPS组（p<0.05）。3.成骨诱导第7天及第14天时,人参皂苷Rg1成骨诱导组ALP活性高于对照组（p<0.001）;在第7天时人参皂苷Rg1+LPS成骨诱导组和LPS成骨诱导组的ALP活性均高于对照组（p<0.05）。成骨诱导第7天及第14天的ALP染色显示实验组间无显著差异。成骨诱导第21天时,茜素红染色示,仅人参皂苷Rg1成骨诱导组钙结节表达量高于对照组。4.Real-time PCR结果示,经LPS预处理后,各实验组间及与LPS对照组相比,TNF-α、IL-1β、IL-6的m RNA表达水平均无统计学差异。ELISA检测各实验组间及与LPS对照组相比细胞IL-6的蛋白表达水平也无显著差异。结论5μmol/L及10μmol/L人参皂苷Rg1可促进hDPCs增殖,在1μg/mL E.coli LPS刺激状态下其对细胞的促进增殖作用仍存在。5μmol/L人参皂苷Rg1可促进hDPCs成骨分化,但对LPS刺激状态下的hDPCs无促进成骨分化的作用,人参皂苷Rg1对LPS预处理形成的炎症状态下的hDPCs无抗炎作用。
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