【摘 要】
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目的:1.检测重度子痫前期（severe preeclampsia,SPE）和正常妊娠胎盘组织中m RNA表达谱;2.筛选与正常妊娠组比较,SPE胎盘组织中差异表达的m RNAs。方法:1.2017年6月至9月期间,于武汉大学人民医院产科收集正常妊娠妇女和SPE患者胎盘组织,筛选出年龄、孕周、BMI等基本信息匹配的正常妊娠分娩胎盘组织（n=3）和SPE患者胎盘组织（n=3）送安诺优达基因公司进行R
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目的:1.检测重度子痫前期（severe preeclampsia,SPE）和正常妊娠胎盘组织中m RNA表达谱;2.筛选与正常妊娠组比较,SPE胎盘组织中差异表达的m RNAs。方法:1.2017年6月至9月期间,于武汉大学人民医院产科收集正常妊娠妇女和SPE患者胎盘组织,筛选出年龄、孕周、BMI等基本信息匹配的正常妊娠分娩胎盘组织（n=3）和SPE患者胎盘组织（n=3）送安诺优达基因公司进行RNA高通量测序（RNA-Seq）;2.采用生物信息学方法对差异表达基因进行功能分析;3.采用q RT-PCR、IHC等方法验证RNA-Seq结果。结果:1与正常妊娠组相比,SPE组胎盘组织中m RNA表达谱有显著差异。其中差异表达的m RNA共60个,其中上调m RNA 46个,下调m RNA 14个;2.生物信息学分析:GO分析提示差异表达基因主要富集在免疫反应调节,细胞的迁移、黏附,抗原加工及提呈等过程;KEGG分析提示差异表达基因主要富集在细胞黏附分子、哮喘、自身免疫性肠病、肺结核、系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病,提示PE的发生与自身免疫密切相关;3.q RT-PCR、IHC结果提示:SPE组胎盘组织中ISL1的m RNA水平、蛋白水平表达量均显著低于正常妊娠组,且差异具有统计学意义。与高通量测序结果一致。结论:与正常妊娠组相比,SPE患者胎盘组织中m RNA表达谱有显著差异。其中转录因子-ISL1可能是参与PE发生的关键基因。目的:1.明确ISL1在人胎盘组织中表达分布情况;2.研究ISL1对人滋养细胞生物学行为的影响;3.探讨ISL1的下游靶基因。方法:1.采用IHC、IF等技术验证ISL1在人胎盘组织中表达分布情况;2.选择特异性的小干扰RNA（Si RNA）通过Lipo RNAi MAX试剂转染进入人滋养细胞系HTR-8/SVneo,实现对ISL1表达水平的有效敲降。通过细胞划痕实验,Transwell迁移、侵袭实验及血管形成实验验证ISL1对HTR-8/SVneo细胞迁移、侵袭以及血管形成能力的影响;3.通过在线转录因子预测网站结合已有CHIP-Seq数据库预测ISL1的靶基因,采用q RT-PCR技术验证ISL1与其下游靶基因的表达相关性。结果:1.ISL1在人胎盘组织中的血管内皮细胞及各种滋养细胞亚型中均有表达。其中,在绒毛外滋养细胞的表达量最高,且主要表达在细胞核内;2.ISL1-Si RNA-1实现对ISL1 m RNA水平及蛋白水平的有效敲降,敲降效率高达84.7%。细胞功能缺失实验显示:敲降ISL1表达水平后,滋养细胞的迁移、侵袭以及血管形成能力均显著增加;3.在线转录因子预测网站结合已有CHIP-Seq数据库预测发现ZEB1、TGF-β、Wnt5a、GATA3等可能是ISL1的靶基因,q RT-PCR验证发现:敲降ISL1表达后,ZEB1、TGF-β的表达量显著下调,Wnt5a、GATA3的表达无明显变化。结论:ISL1在人胎盘组织中的血管内皮细胞及各种滋养细胞亚型中均有表达。其中,在绒毛外滋养细胞的表达量最高,且主要表达在细胞核内。敲降ISL1的表达后,显著促进人滋养细胞的迁移、侵袭以及血管形成能力。且ISL1的表达量与ZEB1、TGF-β的表达具有显著的相关性。
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