【摘 要】
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目的:将过表达ISL-1和Tbx18的慢病毒转染至ADSCs后,观察其起搏样细胞表型和功能的变化,探索转录因子ISL-1和Tbx18在体外构建生物起搏的可能性。方法:分离培养ADSCs细胞,随机分成Blank、GFP、ISL-1、Tbx18、ISL-1+Tbx18五组,按分组转染病毒。经荧光强度和流式分析确定最适感染复数进行后续实验,并与乳鼠心室肌细胞共培养,共培养期间显微镜下观察ADSCs形态变
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目的:将过表达ISL-1和Tbx18的慢病毒转染至ADSCs后,观察其起搏样细胞表型和功能的变化,探索转录因子ISL-1和Tbx18在体外构建生物起搏的可能性。方法:分离培养ADSCs细胞,随机分成Blank、GFP、ISL-1、Tbx18、ISL-1+Tbx18五组,按分组转染病毒。经荧光强度和流式分析确定最适感染复数进行后续实验,并与乳鼠心室肌细胞共培养,共培养期间显微镜下观察ADSCs形态变化,并记录细胞搏动频率。共培养5-7天后进行起搏细胞的相关m RNA和蛋白表达水平的检测,并通过膜片钳检测细胞内电生理变化。结果:分离贴壁后ADSCs呈长梭形,慢病毒转染ADSCs最适感染复数为50。转染ISL-1和Tbx18后的ADSCs形态发生改变,并伸出似心肌细胞样伪足。主要表现为长梭形、三角形和不规则形三种形态。共培养系统中转染后的ADSCs和NRVMs产生连接,细胞同步搏动。转染ISL-1或Tbx18的细胞SAN特异性基因HCN4、Cx45和Tbx3表达水平上调,而工作心肌特异基因Nkx2.5和Cx43表达水平下调,其中ISL-1+Tbx18组上述基因表达水平相较于ISL-1组和Tbx18组变化更为显著,组间比较均有统计学差异（P<0.05）。免疫荧光可检测到转染ISL-1和Tbx18的细胞存在明显的c Tn T和HCN4表达,而转染GFP组的ADSCs却未见明显表达。实验组ADSCs均可记录到超极化激活的内向电流,其中ISL-1+Tbx18组的较多ADSCs可记录到超极化激活的内向电流。结论:ADSCs成功诱导为具有正常起搏细胞生化特征和电生理特性的起搏样细胞,转录因子ISL-1和Tbx18都具有将ADSCs诱导分化起搏样细胞的能力,但在ADSCs中共同过表达ISL-1和Tbx18能显著增大ADSCs分化为起搏样细胞的比例。
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