种蛋孵化期LED绿光调控对胚胎与雏鸡啄癖相关激素的影响机理

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啄癖是群养鸡中常见的恶性行为,对生产效益、动物福利及疫病防控产生严重影响。近年来,随着LED产业的蓬勃发展,光环境在养殖和孵化中的作用被日益重视,也有不少文献报道了光环境在养殖阶段对啄癖的防控作用,然而其作用机制与机理尚不清晰。本研究以高啄羽品系(High Feather Pecking Line)与低啄羽品系(Low Feather Pecking Line)的鸡作为研究对象,探究LED绿光刺激孵化对子代胚胎期、育雏期的啄癖相关激素水平的调控作用,并从蛋白层面解释其机理,获得不同品系种蛋啄癖生理代际传递机制差异数据库,探明LED绿光孵化对子代啄癖相关激素的调控作用及其通路,揭示光环境调控产前应激子代效应的生理学机制,为解决鸡的啄癖问题提供理论支撑。本研究的主要内容及研究结论如下:(1)不同品种种蛋啄癖相关激素水平与外观品质相关性研究针对鸡母-子代啄癖相关激素传递不明晰的问题,探索了不同品系鸡的母-子代啄癖生理传递介质差异及其与种蛋外观品质的相关性。以包括海兰褐、罗曼粉等在内的16个不同品种鸡的种蛋为研究对象,使用ELISA酶联免疫法,系统探究了不同品系种蛋蛋黄中的啄癖相关激素水平差异,包括五羟色胺(5-HT)、皮质酮(CORT)、多巴胺(DA)和睾酮(TES)。结合种蛋的外观品质(色度、体积)分析,发现不同品种母鸡传递至种蛋中的啄癖相关激素各不相同,其中,有且仅有罗曼粉种蛋符合全部高啄癖品系特征,海兰褐种蛋符合全部低啄羽品系特征,且高啄羽品系种蛋体积偏小(P>0.05),色度偏淡(P<0.05),低啄羽品系种蛋则相反。(2)LED绿光调控种蛋孵化与育雏期啄癖相关激素的研究针对高啄羽品系种蛋中啄癖相关激素异常的问题,探究了LED绿光调控孵化对子代胚胎孵化期、育雏期啄癖相关激素的调控作用。以高啄羽品系的罗曼粉蛋鸡与低啄羽品系的海兰褐蛋鸡为研究对象,采用LED单色绿光调控孵化(560nm,20~50 lux,16 L:8 D),对胚胎孵化期啄癖相关激素昼夜节律以及育雏期的机体激素水平进行监测。结果表明黑暗孵化罗曼粉胚胎机体CORT水平显著高于海兰褐胚胎(P<0.05),5-HT水平则显著低于海兰褐胚胎(P<0.05),通过LED绿光调控,显著降低了罗曼粉胚胎孵化期胚胎的机体CORT水平(P<0.05),提高了其5-HT水平(P<0.05),证明了孵化期LED绿光对啄癖相关激素的调控作用,可能能够减少啄癖行为的发生;且LED绿光促进机体形成非内源性的节律,诱导胚胎提前适应外界光环境的周期变化。育雏期的研究结果表明,LED绿光孵化对啄癖相关激素的调控作用在育雏期仍然存在,证明了LED绿光调控孵化对啄癖的调控作用效果具有延续性。(3)LED绿光调控孵化对雏鸡下丘脑影响的蛋白质组学研究基于4D蛋白组学方法探究LED绿光调控孵化影响啄癖相关激素水平的可能机制。以绿光/黑暗(G/D)孵化的罗曼粉/海兰褐(R/H)雏鸡的下丘脑样品为研究对象,通过分析质谱结果得到原始文件,使用Maxquant(v1.6.15.0)数据库进行检索,并对数据结果进行质控分析以及蛋白组学功能注释,随后通过蛋白定量分析方法(GO二级分类、KEGG通路分类)进行差异蛋白筛选与功能评估分类。基于分类结果,采用Fisher检验的方法对其进行富集分析,最终得到了差异蛋白调控的具体途径与互作网络。研究结果表明,相较于HD雏鸡,RD雏鸡下丘脑单羧酸转运蛋白1(Monocarboxylate Transporter 1,SLC16A1基因)的表达显著上调,以及细胞线粒体中的NADPH(肾上腺毒素氧化还原酶,FDXR基因)表达显著下调,促进了重定向觅食与应激倾向的啄癖行为的发生,扰乱了外周5-HT系统运行。LED绿光则调控RG组雏鸡下丘脑E1BW42型蛋白(非特征蛋白,GABRA5基因)表达下调,从而降低鸡的应激反应水平,减少应激引发啄癖行为的发生。KEGG通路富集分析结果表明,RD组相较于HD组,其下丘脑5-HT分泌通路功能异常,引起机体5-HT系统功能异常,引发了啄癖行为,而LED绿光则通过调控集合管酸分泌通路,减少啄癖行为的发生。(4)LED绿光与褪黑素协同调控孵化对雏鸡啄癖相关激素与节律的影响针对产前应激引起子代品质下降与啄癖行为发生的问题,以激素水平为表征,揭示了LED绿光调控孵化对产前应激负面子代效应的调控作用。通过种蛋注射CORT模拟产前应激,采用LED单色绿光调控孵化(560 nm,20~50 lux,16L:8 D),探究了LED绿光与褪黑素(MLT)协同CORT注射对产前应激效应的调控作用。研究结果表明,LED绿光调控孵化能够显著改善产前应激所引起的子代血浆5-HT浓度、及CORT浓度升高问题;MLT注射和LED绿光孵化能够协同作用,降低产前应激引起的负面子代效应,并能够进一步调节胚胎的昼夜节律。
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