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目的:测定Amot蛋白在糖尿病足溃疡患者及糖尿病后肢缺血性溃疡小鼠模型创面肉芽组织中的表达,并对血管内皮细胞(VEC)进行高糖及缺氧培养,测定不同条件下培养的VEC细胞Amot蛋白表达的情况,分别从病人、动物模型及细胞三个层面评价高糖及缺血缺氧对该蛋白表达的影响;深入探讨Amot蛋白表达的变化对其促血管生成功能的影响,从而评价其在糖尿病缺血性溃疡愈合的病理过程中可能发挥的作用。方法:1.根据溃疡侧踝肱比(ABI)及血化血红蛋白(GHbAlc)将糖尿病足溃疡患者分为四组:A组ABI≥0.7, GHbAlc<9%; B组ABI>0.7, GHbAlc>9%; C组ABI<0.7, GHbAlc<9%; D组ABI<0.7, GHbAlc>9%。以足部烧伤病人为对照,取各组患者足溃疡创面肉芽组织,用Western blot的方法测定Amot蛋白在各组患者中的表达情况,评价高糖及缺血对该蛋白表达的影响,及其表达差异与溃疡愈合的关系。2.建立糖尿病后肢缺血性溃疡动物模型,用实时荧光定量PCR的方法鉴定并检测Amot mRNA在该动物模型后肢溃疡肉芽组织中的表达情况,探讨其与高糖及缺血条件下伤口愈合的关系。3.在不同葡萄糖浓度及缺氧环境下对VEC细胞进行培养,用Western blot的方法测定不同条件下培养的VEC细胞Amot蛋白表达的差异,在细胞水平观察高糖及缺氧对该蛋白表达的影响。4.用siRNA下调VEC细胞Amot蛋白的表达,通过创伤愈合实验及血管生成实验,观察该蛋白下调后对VEC细胞迁移能力及血管生成功能的影响。结果:1.在糖尿病足溃疡患者及糖尿病后肢缺血性溃疡小鼠模型创面肉芽组织中均检测到了Amot蛋白的表达。2.在各组足溃疡患者中,p80-Amot在对照组和A组患者中表达量最高,与血糖较差的两组(B组和D组)比较,差异有统计学意义(p<0.05)。各组患者足溃疡的预后情况没有明显差异。3. Amot mRNA在各组小鼠后肢溃疡肉芽组织中的表达是有差别的,其中糖尿病缺血性溃疡组表达量最少,与其它各组比较,差异均有统计学意义(p<0.01)。非糖尿病非缺血性溃疡组表达量最多,与糖尿病非缺血性溃疡组比较,差异有统计学意义(p<0.01)。4.在不同葡萄糖浓度及缺氧条件下培养的各组VEC细胞中,p30-Amot在低糖的两组中表达量最多,与其它四组比较差异有统计学意义(p<0.01)。而在低糖培养的两组中,缺氧培养的VEC细胞p130-Amot表达量更少,差异有统计学意义(p<0.01)。5.与正常的VEC细胞比较,转染了Amot siRNA的VEC细胞Amot蛋白的表达降低了93%,这种细胞在创伤愈合实验中迁移能力明显减弱,在血管生成实验中生成血管的数量明显减少。结论:1.Amot参与了糖尿病足溃疡伤口的愈合过程。2.高糖及缺血缺氧可以降低Amot蛋白的表达,而其中高糖对Amot蛋白表达的影响更显著。3.降低Amot蛋白的表达可以使VEC细胞的迁移功能及血管生成功能明显减弱。因此,Amot蛋白在糖尿病足溃疡愈合不良的发病机制中可能起了至关重要的作用。在未来的研究中,可以将它作为糖尿病难愈性溃疡干预治疗的一个新的靶点。