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目的研究异位骨化动物模型;检测瘦素在造模组织中表达水平。研究塞来昔布和帕瑞昔布对炎症反应和异位骨化的作用。研究瘦素或者瘦素联合帕瑞昔布对造模后的炎症及异位成骨的影响。研究N-乙酰基转移酶2基因多态性与骨肉瘤发病率及转移的关系。方法对小鼠进行跟腱切断术建立异位骨化模型,按分组每日给予各相应药物。运用ELISA技术检测LEP蛋白及肿瘤坏死因子;X线摄片及Micro-CT检测骨化情况;组织学染色观察组织形态。骨肉瘤部分实验对NAT2基因多态性位点进行病例对照研究,对基因型进行检测,将临床特征与各基因型多态性进行关联性分析。结果野生型小鼠术后3、5、10周时,实验组瘦素含量明显升高。10周时,实验组影像学显示均出现异位骨化,对照组未见异位骨。第1、3天,塞来昔布组组织中TNF-α含量升高较帕瑞昔布组明显;第15天时均下降至对照水平。第10周,X线及组织学染色示塞来昔布组发生异位骨化的小鼠多于帕瑞昔布组。瘦素基因敲除小鼠术后第1、3天时,组织中TNF-α含量LEP组高于NS和LEP+Parecoxib组;第15天时各组无明显差异。第3周时染色显示LEP组炎症细胞多于其余两组。第10周时Micro-CT示LEP组异位成骨及骨性指标高于其余两组。在骨肉瘤实验部分,在病例组和对照组患者间NAT2 rs1799931 G>A基因型多态性有显著差异;出现肿瘤转移患者的rs1041983 CT基因型出现的频率明显高于未出现转移的患者。结论跟腱切断术是一种有效的异位骨化造模方法。瘦素蛋白在异位骨化造模小鼠的组织中显著升高。帕瑞昔布对炎症反应及异位骨化的抑制作用强于塞来昔布。瘦素可促进局部损伤组织的炎症反应和异位骨化形成。瘦素促进的局部炎症反应和异位骨化可被帕瑞昔布抑制。瘦素促进了局部炎症反应进而促进异位骨化的形成。rs1799931在是骨肉瘤的保护因素,rs1041983多态性与骨肉瘤转移有关。第一部分小鼠异位骨化模型的建立及瘦素在小鼠异位骨化模型的局部表达目的使用跟腱(Achilles’s tendon)切断术法建立野生型小鼠异位骨化(heterotopic ossification,HO)模型;并检测该模型中瘦素(leptin,LEP)在组织中的表达水平。方法选取24只8周龄大小的C57BL/6雄性野生型小鼠,随机分为两组(n=12):对照组(control group)和实验组(跟腱造模组,experimental group)。对照组不进行处理,实验组进行一侧下肢跟腱切断术建立异位骨化模型。在3周、5周和10周时分别对两组小鼠运用ELISA技术检测局部组织的LEP蛋白的含量。第10周X线摄片及Micro-CT检测观察局部骨化情况。结果野生型小鼠术后3周、5周、10周时,实验组局部组织瘦素蛋白含量明显高于对照组;而实验组小鼠双侧跟腱处自身对照无明显差异。10周时,实验组X线及Micro-CT显示跟腱造模处均出现较多异位骨化,对照组未见异位骨。结论跟腱切断术是一种有效的异位骨化造模方法。瘦素蛋白在HO小鼠模型的局部软组织中显著升高。第二部分帕瑞昔布和塞来昔布对创伤导致的炎症反应以及异位骨化形成的作用目的研究塞来昔布(Celecoxib)和帕瑞昔布(Parecoxib)对跟腱造模后的野生型小鼠(C57BL/6小鼠)局部组织炎症反应和异位骨化的作用。方法选取38只8周龄大小的C57BL/6雄性野生型小鼠,随机分为两组(n=19):塞来昔布组(Celecoxib group)和帕瑞昔布钠组(Parecoxib group)。两组均进行跟腱切断术建立异位骨化模型,按分组每日分别给予10mg/kg剂量的相应药物。第1、3和15天,使用ELISA技术检测两组小鼠局部组织的肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factorα,TNF-α)含量。10周后通过X线观察对比异位骨化形成情况,同时使用H&E染色法观察组织学形态。结果术后第1、3天,局部跟腱分离组织中的炎症因子TNF-α含量两组均升高,且塞来昔布组升高较帕瑞昔布组明显;第15天时均下降,并与未手术的野生小鼠无明显差异。术后第10周,X线示塞来昔布组发生异位骨化的小鼠多于帕瑞昔布组,组织学染色示帕瑞昔布组软骨细胞与骨组织形成明显少于塞来昔布组。结论帕瑞昔布对局部炎症反应的抑制作用强于塞来昔布;对异位骨化的抑制作用帕瑞昔布也强于塞来昔布。第三部分帕瑞昔布对造模后给予外源性瘦素的OB/OB鼠的炎症及异位骨化形成的作用目的研究跟腱造模后的OB/OB小鼠皮下分别注射NS、LEP和LEP+Parecoxib三组局部炎症反应以及异位成骨量的差异。方法选取45只8周龄大小的OB/OB瘦素缺乏小鼠,随机分为三组(n=15):生理盐水组(Normal Saline group,NS group)、瘦素组(leptin group,LEP group)和瘦素帕瑞昔布组(LEP+Parecoxib group)。三组均进行跟腱切断术建立异位骨化模型,术后每日分别在皮下注射NS、LEP、LEP+Parecoxib。第1、3及15天,分别对三组小鼠运用ELISA技术检测局部组织的肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factorα,TNF-α)含量。第3、第5和第10周,用组织学染色观察局部损伤跟腱组织的形态学。第10周时对各组小鼠运用Micro-CT评估对比异位骨组织的形态学参数。结果OB/OB小鼠术后第1和第3天时,局部跟腱分离组织中的炎症因子TNF-α含量LEP组高于NS和LEP+Parecoxib组;第15天时各组间无明显差异。第3周时H&E染色显示LEP组炎症细胞浸润量明显大于其余两组。第10周时Micro-CT参数显示LEP组异位成骨量等骨性指标高于其余两组。结论瘦素可促进局部损伤组织的炎症反应;外源性瘦素可促进局部异位骨化形成。瘦素促进的局部炎症反应可被帕瑞昔布抑制,抑制炎症后异位骨化量也相应减少。瘦素促进了局部炎症反应进而促进异位骨化的形成。第四部分NAT2基因多态性与中国年轻人群骨肉瘤发病率及转移的关系目的研究N-乙酰基转移酶2基因多态性与骨肉瘤发病率及转移的关系。方法我们选择了7个NAT2基因多态性位点进行病例对照研究。本研究共纳入了年龄均在20岁以下的260位骨肉瘤患者以及286位对照组患者,所有患者均在2007年2月至2012年3月期间收住入院。运用Taq Man方法对基因型进行检测。将骨肉瘤的临床特征与各基因型多态性进行关联性分析。结果当以CC纯合子基因型作为参照的时候,NAT2 rs1041983 CT基因型与骨肉瘤发病风险的降低有关(CT vs CC:crude OR=0.67,95%CI=0.47–0.96,P=0.029;adjusted OR=0.68,95%CI=0.47–0.97,P=0.033);在病例组和对照组患者间NAT2rs1799931 G>A基因型多态性有显著差异(P=0.035)。将骨肉瘤的临床特征与SNPs的相关性进行分析,发现在出现肿瘤转移患者的rs1041983 CT基因型出现的频率(59.57%)明显高于未出现转移的患者(37.09%),两者差异有统计学意义(P=0.010)。结论在7个被检测的NAT2单核苷酸多态性(SNP)中,rs1799931在中国年轻群体中是骨肉瘤的保护因素,rs1041983多态性与骨肉瘤转移有关,提示预后不良。