【摘 要】
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番荔枝多糖是一种新型的功能性糖,也是番荔枝中主要活性成分。寡糖相比于多糖而言,水溶性更高,活性更高,且更易被人体消化吸收,是一种极具药用价值的功能性糖。本研究通过降解番荔枝多糖来制备番荔枝寡糖,以提高番荔枝寡糖的生物活性。主要研究内容如下:采用国标方法对番荔枝进行基本成分分析,结果如下:水分含量71.07±0.21%,灰分含量0.58±0.04%,脂肪含量0.36±0.03%,蛋白质含量3.03±
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（31871791）
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番荔枝多糖是一种新型的功能性糖,也是番荔枝中主要活性成分。寡糖相比于多糖而言,水溶性更高,活性更高,且更易被人体消化吸收,是一种极具药用价值的功能性糖。本研究通过降解番荔枝多糖来制备番荔枝寡糖,以提高番荔枝寡糖的生物活性。主要研究内容如下:采用国标方法对番荔枝进行基本成分分析,结果如下:水分含量71.07±0.21%,灰分含量0.58±0.04%,脂肪含量0.36±0.03%,蛋白质含量3.03±0.24%,粗纤维含量0.84±0.01%,总酸含量0.48±0.03%,总糖含量23.57±0.13%。通过水提醇沉法对番荔枝多糖进行提取,然后通过除蛋白,透析,冻干得到番荔枝多糖,含量达到96%。以多糖水解率和α-葡萄糖苷酶抑制率为指标,用果胶酶对番荔枝多糖进行降解,通过单因素和正交试验优化酶解工艺,得到番荔枝多糖酶解最优工艺条件为酶解温度53°C,酶解时间2.5 h,底物浓度2 mg/m L,加酶量40 U/mg。在此条件下α-葡萄糖苷酶抑制率最高,为54.65±0.18%。通过薄层色谱法和高效液相色谱法对酶解产物进行组分分析,发现最佳酶解条件下酶解产物含3个寡糖组分,分别命名为ASO1、ASO2和ASO3,其中ASO2含量最高。利用分级醇沉去掉大分子,用吡啶-醋酸酐法对酶解产物进行全乙酰化,分别将寡糖乙酰化衍生物命名为AC-S、AC-Z和AC-X,再通过硅胶柱分离纯化,将产物分别收集,用甲醇-甲醇钠脱乙酰、用葡聚糖凝胶G-15脱盐,分别得到目标寡糖S、Z和X。通过体外α-葡萄糖苷酶抑制实验测定寡糖S、Z和X以及番荔枝多糖的α-葡萄糖苷酶抑制活性,结果显示S的IC 50值为3.21±1.76 mg/m L,Z的IC 50值为0.33±0.21mg/m L（0.63 m M）,X的IC 50值为0.95±0.09 mg/m L,番荔枝多糖的IC50值为2.04±1.35mg/m L,表明寡糖Z的α-葡萄糖苷酶抑制活性明显高于S、X和番荔枝多糖。由于寡糖Z活性最好且含量最高,所以对寡糖Z的结构进行鉴定。利用核磁、质谱、单糖组成以及比旋光度测定,对AC-Z和Z进行结构分析。结果表明AC-Z分子量为938 Da,比旋光度为+30°;Z是一种由葡萄糖和半乳糖醛酸组成摩尔比2:1的三糖,分子量为518 Da,具有β-D-Glc-（1→2）-β-D-Glc-（1→3）-α-D-Gal A的线性骨架,比旋光度为+20°。通过酶促动力学和分子对接模拟方法进一步研究寡糖Z对α-葡萄糖苷酶的潜在抑制机制。酶促动力学结果表明寡糖Z的抑制类型是可逆的,寡糖Z是混合型抑制剂。分子对接实验表明寡糖Z与α-葡萄糖苷酶具有较好结合作用。综上所述,本研究不仅能促进番荔枝多糖开发和利用,还可以开发得到一种新的寡糖作为潜在的降血糖药物。
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