番荔枝渣碱提多糖的结构表征及生物活性研究

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番荔枝是一种药食同源的水果,其药用成分主要是果实和根茎。番荔枝渣是番荔枝果肉经水浸提后的残渣,大多数的残渣直接被丢弃,或者作为饲料,这造成生物资源的严重浪费。研究表明,番荔枝渣中仍含有较多的生物活性成分。本论文本着生物资源再利用的原则,以番荔枝渣为原料,碱提醇沉,分离纯化,得到一种新的酸性多糖,对其进行结构表征及生物活性研究。通过单因素实验和响应面实验联合优化番荔枝渣碱提多糖的最佳提取工艺,最佳工艺条件为Na OH浓度为0.1 mol/L、提取时间2.0 h、液料比(m L/g)30:1,番荔枝渣碱提多糖的得率为7.41±0.02%。碱提取液用乙醇(95%)醇沉,脱蛋白选用sevage法,除色素选用AB-8大孔吸附树脂,3500 Da的透析袋透析,真空冷冻干燥,获得番荔枝渣碱提粗多糖,其多糖含量为65.17±0.13%。番荔枝渣碱提粗多糖的纯化使用DEAE和Sep Hadex G-150分步纯化,得到番荔枝渣碱提纯多糖,命名为AWPA,多糖含量为91.73±0.23%。经高效液相色谱图谱分析可知,AWPA分子量为3.08×10~3KDa。测定AWPA的比旋光度为+70°。单糖组分分析可知,AWPA是由L-阿拉伯糖:D-半乳糖:D-葡萄糖:D-甘露糖和D-半乳糖醛酸组成,其百分比分别为15.58:13.48:60.14:9.02:1.78。红外谱图,甲基化及核磁共振等分析结果可知AWPA的初级结构为α-L-Araf-(1→,→4)-α-D-Glcp-(1→,→4)-β-D-Galp-(1→,→6)-β-D-Glcp-(1→,→4,6)-β-D-Galp(1→,→3,6)-α-D-Manp-(1→。刚果红实验和圆二色谱实验表明AWPA存在螺旋结构。XRD实验结果表明AWPA无晶体结构。由SEM实验可知,AWPA的表层结构是网状且不规则的。AWPA对α-葡萄糖苷酶的IC50为0.667 mg/m L,属于混合型抑制类型;AWPA对α-淀粉酶的IC50为1.360 mg/m L,属于竞争性抑制类型。AWPA的血凝比活力为256HU/mg,以及血凝前后扫描电镜结果分析,均表明AWPA具有促进凝血功能。此外,当AWPA浓度为3 mg/m L时,对DPPH的清除率达到58.7%;AWPA对羟自由基的清除能力为42.5%;AWPA清除O2-的能力达到26.7%;AWPA对ABTS+自由基的清除率达到了58.4%,表明了AWPA具有良好的抗氧化活性。
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