论文部分内容阅读
目的:1.探究肠促胰岛素类似物DA3-CH和利拉鲁肽（Liraglutide）对糖尿病脑缺血再灌注损伤模型大鼠的神经保护作用（神经功能缺损评分、梗死面积百分比及组织病理学改变）,比较两种类似物的作用效果;2.探究DA3-CH和利拉鲁肽（Liraglutide）对糖尿病脑缺血再灌注损伤模型大鼠氧化应激的影响及其相关机制,是否与激活Nrf2/ARE信号通路相关,并比较二者对该通路的作用强弱。方法:将雄性SD大鼠72只随机分为4组:空白组（Sham组,n=18）、模型组（Model组,n=18）、DA3-CH给药组（DA3-CH组,n=18）、利拉鲁肽给药组（Liraglutide组,n=18）。Sham组不给予特殊处理,与其它组别大鼠在同等环境下饲养,余3组均使用STZ进行糖尿病造模,糖尿病造模成功后,DA3-CH组和Liraglutide组分别腹腔注射DA3-CH（10nmol/kg,1次/天）、利拉鲁肽（10nmol/kg,1次/天）连续14天,余组别腹腔注射等体积生理盐水连续14天。14天后测各组大鼠尾静脉血糖,随后Model组、DA3-CH组和Liraglutide组进行脑缺血再灌注损伤模型制备,在缺血2h再灌注22h后测各组神经功能缺损评分（m NSS）,断头取脑后TTC法测脑梗死面积百分比,HE染色观察缺血区脑组织病理形态,WST-1法测定SOD活性,TBA法测定MDA含量,Western-blot和免疫组化法检测缺血半暗带脑组织Nrf2/ARE通路蛋白Nrf2、HO-1、NQO1的表达。结果:1.血糖水平:与Sham组相比,余三组血糖水平均明显升高（P<0.001）;与Model组相比,DA3-CH组和Liraglutide组的血糖水平均降低（P<0.01）;DA3-CH组和Liraglutide组的血糖水平无明显差别（P>0.05）。2.神经功能缺损评分（m NSS）:与Sham组相比,余三组的m NSS评分均显著增高（P<0.001）;与Model组相比,DA3-CH组和Liraglutide组的m NSS评分均有所降低（DA3-CH,P<0.001;Liraglutide,P<0.01）;DA3-CH组的m NSS评分较Liraglutide组更低（P<0.05）。3.梗死面积:Sham组染色均匀一致,为红色正常脑组织,余三组均可见白色梗死脑组织和红色正常脑组织。与Sham组,余三组的梗死面积显著增高（P<0.001）;与Model组相比,DA3-CH组和Liraglutide组梗死面积均减少（P<0.001）;DA3-CH组梗死面积低于Liraglutide组（P<0.01）。4.HE染色:Sham组大鼠脑组织细胞形态大小基本一致,分布均匀,胞质充盈,核仁清晰;与Sham组相比,Model组、DA3-CH组、Liraglutide组均可见大鼠脑组织细胞受损,分布相对稀疏,出现较多空泡状水肿、变性,以及核固缩和核溶解发生;与Model组相比,两给药组空泡状水肿、变性,以及核固缩、核溶解情况有所减轻,且DA3-CH组减轻更明显。5.氧化应激指标与Sham组相比,余三组缺血半暗带脑组织的MDA含量均显著增高（P<0.001）;与Model组相比,DA3-CH组、Liraglutide组的MDA含量均降低（P<0.001）,DA3-CH组的MDA含量较Liraglutide组更低（P<0.001）。与Sham组相比,余三组缺血半暗带脑组织的SOD活力均显著下降（P<0.001）;与Model组相比,DA3-CH组、Liraglutide组的SOD活力均增加（P<0.001）,DA3-CH组的SOD活力较Liraglutide组更高（P<0.001）。6.Nrf2/ARE通路蛋白表达免疫组化结果显示:与Sham组相比,余三组大鼠大脑皮层的Nrf2阳性细胞数均增加（P<0.001）;与Model组相比,DA3-CH组、Liraglutide组的Nrf2阳性细胞数均增加（P<0.001）;DA3-CH组的Nrf2阳性细胞数较Liraglutide组更多（P<0.001）。同样,与Sham组相比,该通路的下游蛋白HO-1、NQO1阳性细胞数在余三组中均增加（P<0.001）,与Model组相比,DA3-CH组、Liraglutide组的HO-1及NQO1的阳性细胞数均增加（P<0.001）,DA3-CH组较Liraglutide组的HO-1及NQO1的阳性细胞数更多（P<0.001）。蛋白印迹结果显示:与Sham组相比,余三组大鼠缺血半暗带大脑皮层的Nrf2表达均增加（P<0.001）;与Model组相比,DA3-CH组、Liraglutide组的Nrf2表达增加（P<0.001）;DA3-CH组的Nrf2表达量较Liraglutide组更多（P<0.01）。同样,与Sham组相比,该通路的下游蛋白HO-1、NQO1的表达量在余三组中均增加（P<0.001）,与Model组相比,DA3-CH组、Liraglutide组的HO-1及NQO1的表达量均增加（P<0.001）,DA3-CH组较Liraglutide组的HO-1及NQO1的表达量更多（HO-1,P<0.001;NQO1,P<0.01）。结论:1.肠促胰岛素类似物DA3-CH和利拉鲁肽均可减少糖尿病脑缺血再灌注损伤模型大鼠的梗死面积,减低神经功能缺损评分,减轻缺血区脑组织病理改变,有明确的神经保护作用,且DA3-CH效果优于利拉鲁肽。2.DA3-CH和利拉鲁肽可通过激活Nrf2/ARE通路减轻糖尿病脑缺血再灌注损伤大鼠模型的氧化应激损伤,且DA3-CH作用更强。