论文部分内容阅读
背景和目的：
宫颈癌(Cervical cancer)在妇科恶性肿瘤中最常见,手术及放疗对患者的生育能力及生活质量影响较大,因此化疗在宫颈癌的治疗中受到越来越多的关注。
紫杉醇(paclitaxel,PTX)是目前治疗宫颈癌常用的基础化疗药物,能够阻止肿瘤细胞的正常增殖和分裂,使肿瘤细胞停止在有丝分裂过程中的有丝分裂期即:G2/M期,引起细胞发生凋亡。但是其主要的不良反应是骨髓抑制引起粒细胞减少、过敏反应、肝肾功能损害等不可避免,因此需要找到一种更好的方法来降低紫杉醇的使用剂量及减轻不良反应。
S100钙结合蛋白A4(S100 calcium binding protein A4,S100A4)在宫颈癌组织中高表达,并且与肿瘤的侵袭转移及临床分期密切相关。目前肿瘤靶向治疗是专门针对与肿瘤形成及发展密切相关的因子来设计其阻滞剂,从而达到杀灭肿瘤细胞的作用,尤其是单克隆抗体的靶向治疗的研究最多。
本实验通过四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法及流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测法来探讨不同浓度紫杉醇、不同浓度S100A4单克隆抗体以及S100A4单克隆抗体联合紫杉醇对Hela细胞体外生长的影响,以期待为宫颈癌的治疗提供理论依据。
材料和方法：
常规方法复苏Hela细胞,复苏成功后对宫颈癌Hela细胞进行常规体外培养,观察细胞体外生长的情况和细胞形态的变化。
分组:1、紫杉醇单药组,药物浓度为10ug/ml、20ug/ml、40ug/ml、80ug/ml、160ug/ml。2、S100A4单抗组,抗体浓度为1ug/ml、5ug/ml、10ug/ml、20ug,/ml。3、联合用药组,S100A4单抗浓度为10 ug/m1分别联合紫杉醇各个浓度(10μg,/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、16μg/ml)。4、空白组仅有同等浓度的1640培养液。5、对照组除了加入1640培养液和Hela细胞外,不加入任何干扰因素。
方法:1、根据分组行药物干预后分别培养24h、48h、72h后采用MTT比色法检测细胞抑制率。2、采用流式细胞仪检测紫杉醇10ug/ml、S100A4单抗10ug/ml以及二者联合分别干预并培养24小时的细胞凋亡率并且同时分析细胞周期的分布。
采用SPSS17.0统计分析软件进行分析对照组和各个实验组之间有无显著性差异,以α=0.05作为检验标准。
结果:
1倒置电子显微镜下观察正常Hela细胞形态可见细胞大小正常,形态良好。
2 MTT比色法发现紫杉醇在10 ug/ml、20ug/ml、40ug/ml、80ug/ml、160ug/ml浓度范围内在体外对宫颈癌Hela细胞的生长的抑制作用逐渐增强,并且呈时间和浓度依赖性,各组之间比较差异有统计学意义(P＜0.05)。
3 MTT比色法发现S100A4单克隆抗体在1ug/ml、5ug/ml、10ug/ml、20ug/ml浓度范围内在体外对宫颈癌Hela细胞的生长有抑制作用,有浓度依赖性和时间依赖性,各组之间比较差异有统计学意义(P＜0.05)。
4 S100A4单抗10ug/ml联合紫杉醇(10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、160μg/ml)比单独用紫杉醇时对宫颈癌Hela细胞的抑制率增高,差异有统计学意义(P＜0.05)。
5 FCM法检测细胞的凋亡率分别为对照组(0.95±0.11)％、紫杉醇单药组(31.85±0.52)%、S100A4单抗组(6.09±0.24)%及紫杉醇联合S100A4单抗组(35.64±0.83)%,各组之间比较差异有统计学意义(P＜0.05)。分析各组细胞的细胞周期分布:紫杉醇组G0/G1期和S期细胞比例比对照组降低、G2/M期比对照组比例增加,S100A4单抗组G0/G1期比对照组比例增加、G2/M期和S期细胞比例比对照组降低,两药联合后G0/G1期细胞比例比紫杉醇单药组增加、G2/M期细胞比例增加、S期细胞比例降低。
结论：
1紫杉醇对宫颈癌Hela细胞生长增殖的抑制作用呈现明显时间、浓度依赖。
2 S100A4单克隆抗体对Hela细胞生长增殖的抑制作用呈时间、浓度依赖。
3 S100A4单抗联合紫杉醇后可提高宫颈癌Hela细胞对紫杉醇的敏感性,二者之间有协同抗肿瘤作用。