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胃癌作为一种恶性肿瘤,已经成为严重威胁人们身体健康的重要因素。由于胃癌早期没有明显标志物,导致绝大部分患者确诊时已经到了中晚期,虽然诊断和治疗手段不断更新,但是胃癌患者的生存率仍然较低。因此,寻找更为有效的标志物,分析胃癌发生的具体机制,对胃癌的诊断和治疗有着积极作用。LncRNA是一种长度超过200nt的非编码RNA,主要在细胞核和细胞质中表达。LncRNA在肿瘤的发生和发展过程中有着非常重要的作用,LncRNA可以与mRNA、DNA和蛋白质相互作用,参与各种转录和翻译的过程,进而影响肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭和耐药等多方面的功能。目前的研究发现,LINC02535作为LncRNA的一种,能够通过调控相关基因以及信号通路,进而影响宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭。但是,LINC02535是否在胃癌的形成中发挥作用尚未明确。本研究通过全转录组测序发现,LINC02535在病人胃癌组织中高表达,且差异极显著。并且通过体内和体外实验研究发现,LINC02535能够促进胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭以及抑制胃癌细胞的凋亡。另外,分子机制研究发现,LINC02535与ADAR2相互作用,共同调控p53信号通路,影响胃癌的发生发展。第一部分胃癌样本全转录组测序分析及LINC02535在胃癌细胞中的功能研究目的:胃癌样本全转录组测序分析以及体内和体外研究LINC02535对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。方法:通过采集胃癌组织和对应癌旁正常组织样本进行全转录组测序。利用荧光定量 PCR 检测 LINC02535在人胃癌细胞系（SGC7901、MGC-803、HGC-27 和 BGC823）和正常胃粘膜上皮细胞系（GES-1）中的表达水平。构建干扰LINC02535以及过表达LINC02535的质粒。通过在高表达LINC02535的细胞系SGC7901和MGC803中转染干扰LINC02535质粒,下调LINC02535的表达,以及在低表达LINC02535的细胞系HGC27和BGC823中转染过表达LINC02535质粒,上调LINC02535的表达后,采用CCK-8实验以及克隆形成实验检测胃癌细胞的增殖能力,划痕实验测定胃癌细胞的迁移能力,Transwell实验检测胃癌细胞的侵袭能力,流式检测胃癌细胞的凋亡,WB实验检测迁移和凋亡相关蛋白的表达,阐述LINC02535对胃癌细胞迁移和凋亡的具体机制。另外,通过在BALB/c-nu雄性裸鼠皮下注射si-LINC02535和对照NC的SGC7901稳转细胞株,然后观察肿瘤的生长速度以及肿瘤中相关蛋白的表达,进一步探索LINC02535在体内和体外对胃癌发生发展影响。结果:全转录组测序结果显示,499个表达差异显著基因表达上调,627个差异基因表达下调。GO和KEGG通路分析发现这些差异表达基因主要参与细胞周期、cAMP信号通路、p53信号通路和同源重组等相关信号通路。与正常胃粘膜上皮细胞系（GES-1）相比,人胃癌细胞系（SGC7901、MGC803,HGC27和BGC823）中LINC02535的表达显著上调。细胞功能研究结果显示,与对照相比,干扰LINC02535的胃癌细胞系SGC7901和MGC803细胞增殖、迁移和侵袭能力有显著的下降,细胞凋亡率升高,迁移和凋亡相关蛋白的表达也相应的升高或降低;与之相反,过表达LINC02535胃癌细胞系HGC-27和BGC823细胞增殖、迁移和侵袭能力有显著的升高,细胞凋亡率下降,迁移和凋亡相关蛋白的表达也相应的升高或降低。体内实验发现,与对照NC的SGC7901稳转细胞株相比,si-LINC02535细胞株注射裸鼠皮下,肿瘤体积和重量都显著下降。结论:LINC02535在胃癌组织中的高表达,通过促进胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭以及抑制胃癌细胞的凋亡影响胃癌的发生发展。第二部分LINC02535与ADAR2相互作用及ADAR2在胃癌细胞中的功能研究目的:探究LINC02535与ADAR2相互作用机制以及ADAR2对胃癌的影响。方法:通过RIP实验验证LINC02535与ADAR2的相互结合。利用荧光定量PCR检测ADAR2在人胃癌细胞系SGC7901,BGC823,MGC803,HGC27和正常胃粘膜上皮细胞系GES-1中的表达水平。构建过表达ADAR2质粒。通过在低表达ADAR2细胞系HGC27和MGC803中转染过表达ADAR2质粒,采用CCK-8实验以及克隆形成实验检测胃癌细胞的增殖能力;划痕实验测定胃癌细胞的迁移能力;Transwell实验检测胃癌细胞的侵袭能力;流式检测胃癌细胞的凋亡;WB实验检测与迁移和凋亡相关蛋白的表达阐述ADAR2对胃癌细胞迁移和凋亡的具体机制。在体内实验中,通过在BALB/c-nu雄性裸鼠皮下注射ADAR2过表达和对照NC的MGC803稳转细胞株,然后观察肿瘤的生长速度以及肿瘤中相关蛋白的表达进一步探索ADAR2对胃癌细胞影响。结果:与正常胃粘膜上皮细胞系（GES-1）相比,人胃癌细胞系（SGC7901,BGC823,MGC803和HGC27）中ADAR2的表达下调。体外的结果显示,与对照相比,过表达ADAR2胃癌HGC27和MGC803细胞系增殖、迁移和侵袭能力有显著的下降,细胞凋亡率升高,凋亡相关蛋白表达升高,迁移相关蛋白表达降低。体内实验发现,与对照NC的MGC803稳转细胞株相比,ADAR2过表达细胞株注射裸鼠皮下后,肿瘤的体积和重量都显著下降。结论:LINC02535与ADAR2能够相互结合;ADAR2在胃癌组织中的低表达,且ADAR2通过抑制胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭以及促进胃癌细胞的凋亡影响胃癌的发生发展。第三部分LINC02535与ADAR2共同调控p53信号通路影响胃癌发生的分子机制目的:探究LINC02535与ADAR2相互作用如何共同调控p53信号通路影响胃癌发生方法:通过KEGG数据库分析p53信号通路表达差异相关基因。进一步通过荧光定量PCR实验检测LINC02535干扰细胞株与ADAR2过表达细胞株中这些差异基因的表达变化。并在胃癌肿瘤组织和正常组织中再次确认这些基因的表达变化差异。结果:KEGG数据库分析结果显示p53信号通路中有8个表达显著差异基因（BID、RRM2、CDK1、CCNB1、CCNE2、CHEK1、CCNB2、GTSE1）表达上调,2个表达显著差异基因（GADD45B和RPRM）表达下调。荧光定量PCR实验显示,与对照组相比,LINC02535干扰细胞株与ADAR2过表达细胞株中,基因BID、RRM2、CDK1、CCNB1、CCNE2、CHEK1、CCNB2、GTSE1 表达都明显被抑制,而基因GADD45B和RPRM表达明显增加。在胃癌肿瘤组织中,这10个基因的表达变化趋势与KEGG分析结果一致。结论:LINC02535与ADAR2共同调控p53信号通路影响胃低分化腺癌的发生。