青南藏区泡型包虫病血清特异性miRNA的筛选与鉴定

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目的:本研究通过采用miRNA微阵列实验对青南藏区藏族泡型包虫病患者及藏族健康者血清miRNA的表达谱进行分析研究,筛选出与泡型包虫病相关的miRNA,利用qRT-PCR技术扩大样本进行验证,得到与泡型包虫病相关的血清特异性miRNA。这些miRNA有望作为泡型包虫病新的生物学标志物。方法:1.采集泡型包虫病患者血清10份,性别、年龄相匹配的健康者血清10份,提取血清中总RNA,采用miRNA微阵列实验检测所采集的泡型包虫病患者与健康者血清miRNA表达谱。通过对泡型包虫病患者与健康者血清中表达的miRNA进行表达量的分析比较,找出表达具有差异性的miRNA,并筛选出与泡型包虫病发病相关的miRNA。2.利用qRT-PCR技术,对从miRNA微阵列实验中筛选出的miRNA扩大样本量进行验证。样本数量为泡型包虫病患者血清50份,性别、年龄相匹配的健康者血清50份。计算出差异表达miRNA的差异倍数,并将qRT-PCR实验结果与miRNA微阵列实验结果进行比较。3.运用靶基因预测软件对验证出的与泡型包虫病相关的差异miRNA进行靶基因的预测,并对预测出的靶基因进行GO与KEGG Pathway分析。结果:1.miRNA微阵列实验检测发现,在病例组与对照组中共有2615个miRNA表达。其中5个miRNA仅在对照组中表达,分别为:has-miR-6891-5p,has-miR-4274,has-miR-3191-5p,has-miR-6750-3p,has-miR-6892-3p;34个miRNA仅在病例组中表达,分别为:has-miR-19b-3p,has-miR-5701,has-miR-4262,has-miR-6890-3p,has-miR-3202,has-miR-5698,has-miR-6769a-3p,has-miR-3074-3p,has-miR-6892-5p,has-miR-6769a-5p,has-miR-302e,has-miR-6751-3p,has-miR-1468-3p,has-miR-8065,has-miR-8053,has-miR-200b-5p,has-miR-135b-5p,has-miR-4468,has-miR-302b-3p,has-miR-301b-3p,has-miR-1910-3p,has-miR-30e-5p,has-miR-6870-3p,has-miR-133a-5p,has-miR-6882-5p,has-miR-1323,has-miR-1205,has-miR-6880-5p,has-miR-4665-3p,has-miR-8062,has-miR-7106-3p,has-miR-6893-5p,has-miR-320c,has-miR-6871-5p。2.泡型包虫病患者血清中共有74个miRNA与健康者血清中miRNA的表达有差异(|log2(Foldchange)|≥1,P-value≤0.05),其中上调表达39个,下调表达35个。3.经qRT-PCR实验验证,泡型包虫病患者血清中has-miRNA-4725-3p的相对表达量是健康者的1.26倍(经检验差异有统计学意义,P<0.05)。4.预测has-miRNA-4725-3p调节的靶基因主要参与PI3K-AKT信号通路,RAS信号通路,MAPK信号通路,钙信号通路等。结论:青南藏区藏族泡型包虫病患者与健康者血清中miRNAs的表达具有差异性。has-miRNA-4725-3p可能能够作为泡型包虫病一种新的生物学标志物。has-miRNA-4725-3p调控的靶基因主要参与PI3K-AKT信号通路,RAS信号通路,MAPK信号通路,钙信号通路等。但这些靶基因与泡型包虫病之间的关系仍需进一步验证。
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