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第一部分 P COS大鼠模型的构建以及吡格列酮抑制PC OS大鼠模型的构建 目的: 1.构建脱氢表雄酮(DHEA)诱导的幼年雌性 Wistar大鼠多囊卵巢综合征(PCOS)模型。 2.探讨吡格列酮是否影响DHEA诱导的PCOS大鼠模型的构建。 方法:选取21日龄雌性Wistar大鼠40只,随机数分成PCOS模型组(P组)、对照组(C组)、吡格列酮(艾可拓,Ac tos)干预组(P A组)和吡格列酮组(A组),每组10只。P组大鼠于每日晨8时颈背部皮下注射 DHEA6mg/100 g+0.2 ml注射用无菌大豆油;C组大鼠于同时间颈背部皮下注射0.2 ml注射用无菌大豆油; PA组大鼠于同时间颈背部皮下注射DHEA6mg/100g+0.2ml注射用无菌大豆油,同时行吡格列酮生理盐水溶液5mg/k g灌胃;A组大鼠于同时间行吡格列酮生理盐水溶液5 mg/k g灌胃,连续干预20天。于干预的后10天连续行阴道涂片,观察各组大鼠动情周期的变化。干预结束后,测定血清睾酮(T)、空腹血糖(FBG)和空腹胰岛素(FINS)并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);卵巢组织切片行苏木素伊红(HE)染色,观察其形态学变化。 结果: 1.PCOS模型组大鼠失去规律的动情周期,而对照组大鼠具有规律的动情周期。与对照组相比,PCOS模型组大鼠 T、FINS和 HOMA-IR显著升高,而 FBG无显著差异。PCOS模型组大鼠卵巢组织切片 HE染色示多个囊状扩张的卵泡,其颗粒细胞层数减少甚至消失,另外发育阶段卵泡数目明显减少;对照组可见多个不同发育阶段的卵泡,未见囊状扩张的卵泡。 2.与PCOS模型组相比,吡格列酮干预组大鼠T、FINS和HOMA-IR显著降低,而 FBG无显著差异;并且表现规律的动情周期。吡咯列酮干预组大鼠卵巢组织切片 HE染色可见多个不同发育阶段的卵泡,未见囊状扩张的卵泡。 结论:1.DHEA诱导的幼年雌性 Wistar大鼠 PCOS模型卵巢形态以及血液内分泌改变与PCOS患者相似,是研究PCOS发病机制理想的动物模型。 2.吡格列酮可抑制DHEA诱导的PCOS大鼠模型的构建。 第二部分吡格列酮对PC OS大鼠模型卵巢间质细胞PP ARγ表达以及卵巢间质M2型巨噬细胞分布的影响 (一)吡咯列酮对PCO S大鼠模型卵巢间质细胞PP ARγ表达的影响 目的:探讨吡格列酮是否影响 DHEA诱导的PCOS大鼠模型卵巢间质细胞PPARγ的表达。 方法:将第一部分获得的各组卵巢组织石蜡切片行免疫组织化学染色,使用Image Pro Plus6.0(IPP)图像分析软件测量卵巢间质细胞PPARγ染色的平均光密度,使用SPSS20统计分析软件对测量结果进行t检验。 结果: PCOS模型组大鼠卵巢间质细胞 PPARγ平均光密度较对照组和吡咯列酮干预组显著降低;吡格列酮干预组大鼠卵巢间质细胞PPARγ平均光密度与吡格列酮组无显著性差异;对照组大鼠卵巢间质细胞PPARγ平均光密度与吡格列酮组无显著性差异。 结论: 1.正常大鼠单用吡格列酮不影响卵巢间质细胞PPARγ的表达。 2.吡格列酮可增加 DHEA诱导的PCOS大鼠模型卵巢间质细胞 PPARγ的表达。 (二)吡格列酮对PC OS大鼠模型卵巢间质M2型巨噬细胞分布的影响 目的:探讨吡格列酮是否影响DHEA诱导的PCOS大鼠模型卵巢间质M2型巨噬细胞的分布。 方法:将第一部分获得的各组卵巢组织切片行免疫组织化学染色,计数卵巢间质 M2型巨噬细胞分布数量,从而获得每组大鼠卵巢间质单个高倍镜下 M2型巨噬细胞分布的平均数量,使用SPSS20统计分析软件对结果进行t检验。 结果:PCOS模型组大鼠卵巢间质 M2型巨噬细胞数较对照组和吡格列酮干预组显著减少;吡格列酮干预组大鼠卵巢间质 M2型巨噬细胞数与吡格列酮组无显著性差异;对照组大鼠卵巢间质 M2型巨噬细胞数与吡格列酮组无显著性差异。 结论: 1.正常大鼠单用吡格列酮不影响卵巢间质M2型巨噬细胞的分布数量。 2.吡格列酮可增加DHEA诱导的PCOS大鼠模型卵巢间质M2型巨噬细胞的分布数量。