本文主要从以下几个部分展开论述：　　第一部分 Rictor促进卵巢癌腹腔侵袭转移的研究　　目的：研究雷帕霉素靶蛋白复合体2重要组成部分Rictor蛋白在调节卵巢癌腹腔转移方面的作用及具体机制。　　方法：免疫组织化学法检测Rictor在不同组织分型卵巢癌组织标本及配对浆液性卵巢癌原位灶与转移灶中的表达情况；建立并鉴定腹腔高转卵巢癌细胞株；表达谱芯片确定高转细胞株活化通路；转染慢病毒表达的Rictor shRNA，稳定下调Rictor表达，通过Western blot、免疫荧光鉴定Rictor对卵巢癌细胞系上皮间质化（Epithelial-mesenchymal transition，EMT）的影响；Transwell实验鉴定Rictor下调后卵巢癌细胞体外转移能力影响；斑马鱼转移模型鉴定Rictor下调后，卵巢癌细胞体内实验转移能力的影响；实时定量PCR、Western blot鉴定Rictor下调后经典EMT相关转录因子变化；通过已有公开的临床卵巢癌病人表达谱数据确定Zeb1与Rictor相关性；Rictor下调后通过转染Zeb1质粒，Western blot检测Zeb1对Rictor介导的EMT相关蛋白的影响，并用Transwell实验检测对卵巢癌细胞体外侵袭能力的影响；通过建立Nod/Scid卵巢癌原位模型，检测Rictor对高转移性卵巢癌细胞腹腔转移的影响，免疫组织化学法检测Rictor在体内对EMT相关指标及转录因子Zeb1的影响；并通过生存分析检测Rictor对小鼠卵巢癌原位模型的生存的影响。　　结果：Rictor在卵巢癌组织中高表达，并与卵巢癌的分级相关。Rictor在浆液型卵巢癌组织样本中表达最为明显，且在转移灶中表达更高。成功建立腹腔高转卵巢癌细胞株，此细胞株较亲代低转细胞发生上皮间质化现象Ecadherin下调，且Rictor表达增加。经shRNA干扰Rictor表达后，逆转卵巢癌细胞发生的上皮间质化过程，卵巢癌细胞的体外转移能力降低，减少斑马鱼体内转移。Rictor对卵巢癌的上皮间质化过程是通过经典转录因子Zeb1实现。Rictor下调后降低卵巢癌细胞在小鼠腹腔的转移，在体内逆转卵巢癌细胞发生的上皮间质化，延长卵巢癌原位模型的生存期。　　结论：因此提出Rictor可通过Zeb1调控卵巢癌细胞的上皮间质化过程，影响卵巢癌体内体外的侵袭转移，是抑制卵巢癌腹腔转移的较好的分子靶点。通过深入了解Rictor如何影响卵巢癌的体内侵袭转移，可以寻找影响Rictor的功能的可以获得有效的卵巢癌肿瘤治疗药物，为治疗卵巢癌提供新的思路。　　第二部分 条件性敲除Rictor的小鼠卵巢癌模型　　目的：转基因小鼠卵巢癌模型能非常近似模拟人类卵巢癌的发生过程，是研究人类卵巢癌发生机制的极佳工具。通过研究Kras/Pten卵巢癌小鼠模型的发生特点，寻找Rictor在转基因小鼠卵巢癌模型发生中的作用。　　方法：通过将Kras(G12D)小鼠与Pten(flox/flox)小鼠杂交，构建Kras(G12D)Pten(flox/flox)基因型小鼠。通过卵巢囊注射表达Cre酶的腺病毒，引起Kras(G12D)Pten(flox/flox)小鼠卵巢癌的发生。免疫组化鉴定小鼠卵巢癌病灶中mTOR通路指标及Rictor的变化。将Rictor（flox/flox)小鼠与Kras(G12D)Pten(flox/flox)小鼠杂交，构建Kras（G12D）Pten(flox/flox)Rictor(flox/flox)基因型小鼠。　　结果：成功建立Kras（G12D）Pten(flox./flox)基因型小鼠并诱发内膜样卵巢癌。mTOR通路相关指标及Rictor在Kras(G12D)Pten(flox/flox)基因型卵巢癌组织中表达升高。成功构建Kras（G12D）Pten(flox/flox)Rictor(flox/flox)基因型小鼠。　　结论：mTOR通路在Kras(G12D)Pten(flox/flox)基因型卵巢癌活化，Rictor表达升高，提示Rictor在卵巢癌的发生中起到作用。成功构建Kras（G12D）Pten(flox/flox)Rictor(flox/flox)小鼠为进一步研究Rictor在卵巢癌发生进展中的作用提供了基础。　　第三部分 mTOR抑制剂PP242与HDAC抑制剂SAHA通过凋亡与自噬协同杀伤卵巢癌细胞　　目的：组蛋白去乙酰化是表观遗传学的一个重要组成部分，在卵巢癌的发生与进展中的经常发生，影响相应基因功能。哺乳动物雷帕霉素靶蛋白酶（mTOR)在卵巢癌中也是较常见的活化激酶，通过联合应用组蛋白乙酰化酶抑制剂SAHA与哺乳动物雷帕霉素靶蛋白酶抑制剂PP242对卵巢癌细胞系进行体外与体内杀伤，研究新的卵巢癌治疗方法。　　方法：利用CCK-8法检测SAHA与PP242在不同浓度联合下对卵巢癌细胞系SKOV3、A2780的增殖抑制效应，并通过计算机软件CalcuSyn计算两者之间的协同效应指数（combination index，CI）。利用流式细胞仪检测单独与联合药物处理后的卵巢癌细胞凋亡情况，Western Blot法检测凋亡标志性蛋白PARP与Caspase-3的表达与变化情况。卵巢癌细胞通过转染慢病毒表达GFP标记的LC3蛋白后，进行药物处理，荧光显微镜下检测GFP-LC3聚集点的情况以反映细胞在药物处理下的自噬效应。Western blot法检测自噬相关蛋白LC3与P62蛋白的变化情况。通过原位注射卵巢癌细胞系于NOD/SCID免疫缺陷小鼠，建立卵巢癌原位模型，并进行药物单独与联合治疗以评估药物对体内肿瘤的杀伤效应。　　结果：联合应用SAHA与PP242能够明显增强体外肿瘤增殖抑制效应，该效应CI值小于1，表明其为协同效应。流式细胞仪检测凋亡可明显发现SAHA与PP242联合后凋亡显著增加，该凋亡是通过经典Caspase-3/PARP凋亡通路引起。SAHA与PP242联合后显著增加PP242引起的自噬体的形成，自噬相关蛋白LC3在联合药物处理组显著转化为LC3B，P62蛋白明显上调。免疫缺陷小鼠卵巢癌原位模型中，药物联合组显著抑制卵巢癌肿瘤细胞增殖，并明显延长小鼠生存期。　　结论：组蛋白乙酰化酶抑制剂SAHA与哺乳动物靶蛋白酶抑制剂PP242联合应用后能过通过引起凋亡与自噬相关细胞死亡，显著抑制卵巢癌细胞的体内体外增殖。为治疗卵巢癌提供了一种新的药物应用思路。