七叶皂苷钠对缺血性脑损伤的保护作用机制

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目的:1. 建立大鼠左侧大脑中动脉缺血再灌注模型,观察再灌注即刻腹腔内注射七叶皂苷钠,大鼠神经功能缺损程度及脑梗死面积的变化。2. 观察七叶皂苷钠治疗组缺血脑区NF-κB活化程度及凋亡细胞数目与生理盐水对照组的差异。3. 观察不同组缺血脑组织局部炎性损伤的情况:比较缺血脑区小胶质细胞、中性粒细胞及ICAM-1免疫阳性血管数。4. 观察脑梗死病人急性期血清细胞因子的变化,尤其是IL-6与脑梗死面积及神经功能缺损程度间的相关性;并比较七叶皂苷钠治疗组及一般治疗组脑梗死病人血清细胞因子的变化。方法:1. 选用健康雄性SD大鼠,随机分为假手术组、七叶皂苷钠治疗组、生理盐水对照组,脑缺血再灌注模型采用Nagasawa法,阻塞左侧大脑中动脉2h,再灌22h后进行Zealonga评分,断头取脑,视交叉部的脑组织块行TTC染色,采用图像分析法计算视交叉吻端冠状切面梗死面积百分比,相邻脑组织冠状切片行常规HE及TUNEL染色、NF-κB p65、ICAM-1、MPO免疫组织化学染色,比较缺血半球NF-κB p65染色强度,计数凋亡细胞、小胶质细胞及ICAM-1免疫阳性血管、MPO阳性细胞。2. 34例确诊脑梗死急性期病人(发病6h内就诊),依据影像学检查结果分为大面积梗死组及小面积梗死组;依据用药不同分为一般治疗组及七叶皂苷钠治疗组;对入选患者进行神经功能缺损程度评分,10例年龄相当的健康人作为正常对照组, ELISA法检测脑梗死病人不同时间点(6h内、24-36h、3天、7天)血清IL-6、IL-8、TNF-(、IL-1(水平。结果:1. 七叶皂苷钠治疗组大鼠神经功能缺损程度明显减轻(P<0.01);梗死面积缩小(P< 0.01)。2. <WP=7>七叶皂苷钠治疗组大鼠脑组织切片示:NF-κBp65阳性细胞数及核染色强度较生理盐水对照组轻,且治疗组凋亡细胞数明显少于对照组(P<0.01)。3. 再灌注即刻腹腔内注射七叶皂苷钠后,缺血半球MPO阳性细胞数明显减少(P<0.01);小胶质细胞增生减轻(P<0.01);尽管治疗组ICAM-1阳性小血管数较对照组少,但无统计学显著差异(P>0.01)。4. 脑梗死病人血清IL-6水平在发病6h内明显升高,24h-36h达高峰,7天后基本降至正常,大面积梗死组IL-6水平高于小面积梗死组(6h,P<0.01;24-36h,P<0.05),且血清IL-6水平与神经功能评分间存在正相关(r=0.87,P<0.01),七叶皂苷钠治疗3天后血清IL-6水平下降明显(P<0.01),脑梗死病人急性期血清IL-8水平升高(P<0.05),但与梗死面积及神经功能评分间无相关性,无感染并发症的脑梗死病人急性期血清TNF-(、IL-1(水平无明显变化。结论:1. 再灌注即刻腹腔内注射七叶皂苷钠能减少大鼠短暂性局灶性脑缺血梗死面积,改善神经功能缺损,具有神经保护作用。2. 七叶皂苷钠的神经保护作用可能与其抗氧化阻断NF-κB的激活,减少凋亡相关基因表达,减少缺血半暗带区细胞凋亡有关。3. 七叶皂苷钠对小血管的“封闭作用”,可抑制局部炎性细胞的渗出及小胶质细胞增生,但不直接影响血管内皮表面ICAM-1的表达。4. 脑梗死病人急性期血清IL-6水平升高,在一定程度上反映应激反应程度,与梗死面积及神经功能缺损程度有一定相关性。5. 脑梗死病人急性期血清IL-8水平升高,可能加重缺血脑组织局部炎症反应,但与脑梗死面积及神经功能评分间无相关性。6. 无感染合并症的脑梗死急性期病人,血清TNF-(、IL-1(水平无明显变化。7. 七叶皂苷钠治疗3天后病人血清IL-6水平下降明显,与其抗炎、抗渗出、抗氧自由基等神经保护作用相关,一定程度上减轻了机体的应激反应。
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