目的:研究阳离子脂质体介导绿色荧光蛋白基因(GFP)转染小鼠体细胞的最优化参数,筛选转染后阳性细胞作为核移植供体构建重构胚。 方法:本实验通过研究细胞种植密度、DNA剂量、脂质体剂量、转染时间等参数,优化了阳离子脂质体(KeyGenTransIII)的转染条件。在最优化条件下,将绿色荧光蛋白标记基因转染进小鼠体细胞中,并对转染后细胞进行G418筛选,获得稳定表达绿色荧光蛋白的阳性细胞。以此阳性细胞作为核移植供体,以小鼠成熟卵母细胞为核受体构建重构胚,获得发育至带有绿色荧光的转基因囊胚。 结果:细胞G418毒性检验结果:NIH3T3细胞筛选浓度为900μg/mL,筛选后可获得稳定表达的阳性细胞。优化参数结果:NIH3T3细胞,种植密度2.5×104个/mL,KeyGenTransIII 6.0μL,DNA 1.0μg,24h转染效率最高,为58.83％。重构胚发育结果：获得重构胚融合率为59％,卵裂率为33.89％,体外囊胚发育率为15％。 结论:细胞筛选前必须进行G418毒性检验。选择优化的转染参数才能获得最高的转染效率。以脂质体转染后的阳性细胞构建核移植重构胚,可发育出带有阳性标记的转基因囊胚。