论文部分内容阅读
目的:动态观察SAH后小胶质细胞的表型变化规律,探究小胶质细胞极性转化在SAH后的作用及意义方法:通过血管内穿刺法制备SD大鼠SAH模型,将实验动物随机分成假手术组、SAH 6h、24h、3d、7d、14d,通过Western blotting实验检测M1/M2型小胶质细胞特异标记物蛋白（i NOS、TNF-α/Arg-1、Ym-1）表达情况,并通过改良Garcia行为学评分评估SAH后不同时间点大鼠神经功能损伤情况。结果:在不同时间段断头取脑,使用大鼠出血侧半球脑组织实施Western blotting实验,发现SAH后6h,M1表型标志物i NOS,TNF-α表达逐步上调,在24h表达最显著,随后其表达逐渐降低。M2表型标志物Ym-1、Arg-1亦在24h表达明显上调,但在SAH后3d表达迅速减少,与sham组比较差异无统计学意义,在SAH后14d,Ym-1表达明显升高,与sham组比较差异具有统计学意义,Arg-1亦可见升高趋势,但与sham组比较差异不具有统计学意义。通过神经功能评分,发现SAH后1-3d,神经功能损伤最为严重,之后神经功能评分逐步升高,14d时与sham组比较差异不具有统计学意义。结论:该研究通过动物在体实验证实大鼠SAH后24h,小胶质细胞活化,向M1、M2型极化。在SAH后1-3d内小胶质细胞由M2型向M1型极化转变,促炎因子分泌增加。SAH后3-14d内,虽然仍以M1型小胶质细胞为主,但M2型小胶质细胞数量开始逐渐增加,14d时M2型小胶质细胞为主,修复SAH后脑损伤。目的:通过实验观察大鼠SAH后早期脑损伤（early brain injury,EBI）的病理生理特点,探讨Mincle受体在SAH早期脑损伤中的效应及可能机制。方法:血管内穿刺法制备大鼠SAH模型,在SAH后1.5h,脑室给予Mincle受体配体SAP130重组蛋白,通过Western blotting实验检测SAH后24h大鼠出血侧半球脑组织M1/M2型小胶质细胞分泌的特异性蛋白（i NOS、TNF-α、Arg-1、Ym-1）,免疫荧光双标染色观察M1型小胶质细胞数量（M1型:IBA-1、CD86）,使用改良Garcia行为学评分评估大鼠神经功能缺损情况。结果:与SAH组比较,激活Mincle受体促进SAH后24h小胶质细胞M1表型标记物（i NOS、TNF-α）表达上调,M2表型标记物（Arg-1、Ym-1）表达下调,抑制Mincle受体,M1表型标记物（i NOS、TNF-α）表达下调,M2表型标记物（Arg-1、Ym-1）表达上调。免疫荧光结果显示,激活Mincle受体后,脑组织中IBA-1+CD86+细胞数量增多。抑制Mincle受体后,则IBA-1+CD86+细胞数量减少。另外,Mincle受体激活后,SAH大鼠神经功能评分明显降低。结论:Mincle受体介导小胶质细胞向M1型极化,促进SAH后神经炎症,加重SAH后神经功能损伤。目的:实验干预Mincle/Syk通路的关键靶点,观察下游信号分子的表达变化,探讨Mincle受体调控小胶质细胞表型的具体机制。方法:血管内穿刺法制备大鼠SAH模型,分别通过脑室注射Mincle-siRNA、SAP130,通过Western blotting实验检测PI3K、AKT、p-AKT、GSK3β、p-GSK3β表达情况。腹腔注射Syk激酶抑制剂Piceatannol后,通过Western blotting实验检测Syk以及小胶质细胞M1表型标记物（i NOS、TNF-α）和M2表型标记物（Arg-1、Ym-1）表达情况。结果:给予Syk激酶抑制剂后,能明显降低p-Syk表达,并降低Mincle受体激活介导的炎症反应,i NOS、TNF-α表达降低,Arg-1、Ym-1表达增多,促进小胶质细胞向M2型极化。激活Mincle受体后,PI3K表达上调,p-AKT/AKT、p-GSK3β/GSK3β比值增加,沉默Mincle受体后,具有相反的表达情况。结论:Mincle/Syk通过下游PI3K/AKT/GSK3β信号通路介导小胶质细胞向M1型极化,加重SAH后炎症反应,而抑制Mincle受体下游分子Syk,能促进小胶质细胞向M2型极化,减轻SAH后炎症反应。目的:异甘草素（Isoliquiritigenin,ISL）干预SAH大鼠,观察大鼠SAH后神经功能情况,探讨ISL通过干预Mincle受体调控小胶质细胞表型改变的具体机制。方法:血管内穿刺法制备大鼠SAH模型,SAH后1.5h脑室注射SAP130,SAH后0.5h、12h腹腔注射ISL。通过干湿法检测ISL对SAH大鼠脑水肿的影响;使用改良Garcia行为学评分评估给予ISL后SAH大鼠24h神经功能损伤情况;通过Western blotting实验检测给予ISL后SAH大鼠24h时M1表型标记物（i NOS、TNF-α）和M2表型标记物（Arg-1、Ym-1）,以及Mincle/Syk/PI3K/AKT/GSK3β信号的表达情况。结果:给予ISL后,减轻SAH大鼠脑水肿及神经功能损伤程度,M1表型标记物（i NOS、TNF-α）表达下调,相反,M2表型标记物（Arg-1、Ym-1）表达上调,促进小胶质细胞向M2型极化。另外,ISL能抑制Mincle/Syk信号,下调PI3K表达,降低p-AKT/AKT、p-GSK3β/GSK3β比值,抑制PI3K/AKT/GSK3β通路。结论:药物ISL通过抑制Mincle受体及下游PI3K/AKT/GSK3β信号通路,介导小胶质细胞向M2型极化,减轻SAH后炎症反应,促进损伤修复。