第一部分从线粒体脂肪酸代谢和能量稳态探讨小檗碱对肾小球足细胞保护作用的机制目的小檗碱干预DKD小鼠或永生化肾小球足细胞,从糖脂代谢、肾脏功能、肾小球组织形态学、足细胞线粒体结构与功能、线粒体能量代谢等方面探讨小檗碱保护足细胞改善糖尿病肾脏病的相关分子机制。方法利用非靶向代谢组学对比DKD患者与对照组血浆中代谢物差异,并采用db/db糖尿病肾脏病小鼠作为DKD动物模型,随机分为模型组,小檗碱低剂量组,小檗碱高剂量组,db/m小鼠作为正常对照组。药物干预8周,比较各组小鼠血糖、血脂、ITT、OGTT、血浆FFA等差异。HE、PAS染色观察各组肾小球形态结构变化;扫描电镜观察各组足细胞足突。离体实验中,细胞毒性实验确定小檗碱及棕榈酸的合适干预浓度及时间,小檗碱预处理足细胞12h,继与棕榈酸干预8h,比较各组细胞结构功能,细胞内氧化应激反应,线粒体形态结构,能量代谢状态,与线粒体动力学和生物能相关蛋白的表达。结果非靶向代谢组学结果表明,DKD患者与对照组的代谢物差异明显,提示DKD患者存在线粒体功能异常、能量代谢障碍。在DKD小鼠模型中,BBR治疗8周能显著改善糖脂代谢紊乱、足细胞损伤、肾小球硬化、细胞内脂质聚积;BBR能同时改善DKD动物模型及PA诱导的足细胞损伤模型中线粒体ROS生成过多、结构功能紊乱及FAO障碍。BBR的系列保护作用伴随着能够调控线粒体生物能和FAO的能量代谢调控因子PGC1a相关信号通路的活化。结论小檗碱干预能够改善脂质代谢紊乱,促进线粒体能量代谢稳态,减轻肾小球足细胞损伤,相关分子机制可能是BBR能够调控与线粒体动力学和生物能相关的能量代谢因子PGC1a的活性,从而发挥保护足细胞治疗DKD的作用。第二部分从线粒体动力学探讨小檗碱对肾小球足细胞保护作用的机制目的小檗碱干预永生化肾小球足细胞,观察其对高脂诱导损伤的足细胞线粒体结构与功能、线粒体能量代谢的影响并探讨相关分子机制。方法细胞毒性实验确定小檗碱及棕榈酸的合适干预浓度及时间,小檗碱预处理足细胞12h,予棕榈酸干预8h,比较各组细胞形态功能,损伤凋亡指标,氧化应激反应,线粒体形态结构及分裂与融合状态,细胞能量代谢,及与分裂融合相关蛋白的表达。结果棕榈酸可诱导足细胞损伤,使细胞内氧化应激反应增强,线粒体分裂增多,能量代谢功能异常。小檗碱预处理能够减轻细胞内ROS水平,抑制线粒体过度分裂,改善足细胞损伤和凋亡。通过下调或过表达Drp1蛋白能显著影响线粒体功能、细胞内ROS水平及足细胞状态。BBR可通过抑制线粒体分裂相关蛋白Drp1的活性,并促进PGC1α的表达,从而发挥保护足细胞的作用。结论小檗碱预处理可保护足细胞,抑制PA诱导的细胞损伤和凋亡,减轻细胞内ROS,抑制线粒体过度分裂、促进融合,相关分子机制可能是调控线粒体动力学和能量代谢相关的线粒体分裂蛋白Drp1的水平,从而发挥保护作用。第三部分胡芦巴丸化裁方治疗糖尿病肾脏病保护足细胞作用初探目的胡芦巴丸化裁方干预糖尿病肾脏病小鼠,从肾小球及足细胞结构与功能、足细胞线粒体亚细胞结构等探究胡芦巴丸化裁方的肾脏保护作用。方法采用db/db自发糖尿病小鼠作为DKD动物模型,随机分为模型组,胡芦巴丸化裁方组,db/m小鼠作为正常对照组。药物干预6周,比较各组小鼠血糖、血脂、ITT、OGTT、尿微量白蛋白、血浆FFA等差异。HE、PAS、Masson染色观察各组肾小球形态结构变化;透射电镜观察各组足细胞足突和肾小球基底膜。定量分析与线粒体功能和线粒体动力学相关蛋白的表达。高效液相色谱分析胡芦巴丸化裁方指纹图谱,鉴定有效单体成分。结果胡芦巴丸化裁方干预DKD小鼠6周,与模型组相比,药物干预组小鼠体重和空腹血糖升高得到显著改善,但药物对胰岛素敏感性无显著影响。透射电镜下观察,胡芦巴丸化裁方能保护足细胞足突,抑制肾小球基底膜增厚。组织形态学观察,胡芦巴丸化裁方能显著改善肾脏纤维化和肾小球硬化,抑制系膜基质增生、聚积。胡芦巴丸化裁方指纹图谱结果显示其主要单体成分为盐酸黄连碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、胡芦巴碱、肉桂酸、肉桂醛、β-蜕皮甾醇。结论胡芦巴丸化裁方可显著减少糖尿病肾脏病小鼠尿蛋白,保护肾小球滤过屏障,改善肾小球纤维化,保护足细胞结构与功能,上调与线粒体能量代谢和动力学相关的PGC1α和PKM2蛋白的表达。