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目的:
1建立A375细胞研究参数,选择合适的全反式维甲酸浓度及UVB照射剂量等,用于后续实验。
2探讨全反式维甲酸对UVB照射后的A375细胞黑素生成,酪氨酸酶活性,酪氨酸酶蛋白和分子水平的影响。
3研究全反式维甲酸对UVB照射的A375细胞氧化应激状态的保护作用。
方法:
1 MTT法分别检测不同浓度梯度的全反式维甲酸及不同剂量梯度的UVB作用于A375细胞后24h、48h和72h细胞数目的变化,绘制细胞增殖曲线。选择对细胞增殖无明显影响的全反式维甲酸浓度及UVB照射剂量用于后续实验。
2选择合适浓度的全反式维甲酸加入UVB辐射后的A375细胞,NaOH溶解法测定黑素含量,多巴比色法测定酪氨酸酶活性。
3全反式维甲酸作用于UVB辐射后的A375细胞后,Western blot检测酪氨酸酶蛋白含量,QPCR检测酪氨酸酶及cu/znSOD mRNA含量,观察上述数据变化情况。
结果:
1全反式维甲酸(8.3×10-8mol/L)加入UVB(20mj/cm2)照射的A375细胞后,于24h、48h和72h检测黑素含量及酪氨酸酶活性均降低,
2全反式维甲酸加入UVB照射的A375细胞后,24h检测酪氨酸酶蛋白含量及mRNA含量均降低。
3全反式维甲酸作用于UVB辐射后的A375细胞24h后的,cu/znSODmRNA含量升高。
结论:
1全反式维甲酸可通过酪氨酸酶途径降低UVB照射后的A375细胞黑素生成。
2全反式维甲酸可提高A375细胞由于UVB照射造成cu/znSOD的水平,从而提高了细胞的抗氧化能力。