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背景:子宫内膜癌是妇科常见的三大生殖道恶性肿瘤之一。近年来,随着生活水平的提高、人口的老龄化、激素替代治疗的广泛应用,子宫内膜癌的发病率逐年升高。而对于子宫内膜癌的病因虽然多年来一直不断进行探索,但至今尚无明确的结论。子宫内膜癌的流行病学调查显示,80 %~90 %的子宫内膜癌为Ⅰ型,即雌激素依赖型,主要与雌激素的过多刺激有关。而Ⅱ型子宫内膜癌与雌激素的关系不大,因而又称非雌激素依赖型。长期过度的雌激素刺激是子宫内膜癌发生发展的高危因素目前已基本得到肯定。但其具体的作用机制仍不清楚。肥胖、高血压、糖尿病被称为子宫内膜癌的三联征,这一系列代谢紊乱性疾病亦是子宫内膜癌的高危因素。因此,了解雌激素与子宫内膜癌代谢途径中的关键基因之间是否存在联系,将为进一步研究子宫内膜癌的发病机制,以及对子宫内膜癌的预防和治疗提供新的指导方向。
目的:本实验旨在研究雌激素是否通过PI3K/AKT信号通路调控子宫内膜癌细胞中乙二醛酶I(Glyoxalase I,Glo-I)的表达,以及对细胞增殖活性的影响。探讨Glo-I是否可以作为治疗子宫内膜癌的新的靶点。
方法:实验以不同浓度(Con、10-11、10-10 、10-9 M)的雌激素(17-β雌二醇) 作用于人子宫内膜癌Ishikawa和KLE细胞株,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测KLE细胞中Glo-I mRNA的表达。通过RT-PCR及Western blot检测雌激素(17-β雌二醇)处理或PI3K/AKT信号通路抑制剂(LY294002)处理后细胞中Glo-I mRNA及蛋白的表达情况,MTT法检测各种药物处理后的细胞增殖活性。将两种细胞各分为四组:Con组(对照组);LY294002组(LY294002处理组);E2组(17-β雌二醇处理组);E2+LY294002组(LY294002预处理1小时后再用17-β雌二醇处理组)。
结果:⑴经不同浓度的17-β雌二醇(Con、10-11、10-10 、10-9 M)作用于Ishikawa和KLE细胞24小时后,Ishikawa细胞中Glo-Ⅰ mRNA的相对表达量分别为1,1.39±0.03,2.05±0.02,1.05±0.02;KLE细胞中Glo-ⅠmRNA的相对表达量分别为1, 1.58±0.04,1.82±0.03,1.81±0.04,两者均以10-10 M的浓度时表达量达到最高峰(P<0.05)。以10-10 M的17-β雌二醇作用于Ishikaw细胞和KLE细胞48小时后, Glo-Ⅰ 蛋白的相对表达量分别为1.20±0.04,1.79±0.02,高于Con组。⑵以LY294002抑制AKT途径后,Ishikawa细胞中Glo-Ⅰ mRNA的相对表达量为0.91±0.02,蛋白的相对表达量为0.49±0.03;KLE细胞中Glo-Ⅰ mRNA的相对表达量为0.69±0.03,蛋白的相对表达量为0.16±0.02,均低于Con组。⑶Ishikawa细胞中E2+LY294002组Glo-Ⅰ mRNA和蛋白的相对表达量分别为0.87±0.03、0.47±0.02;KLE细胞中E2+LY294002组Glo-Ⅰ mRNA和蛋白的相对表达量分别为1.02±0.04、1.01±0.03,两组细胞均低于相应E2组中Glo-ⅠmRNA和蛋白的相对表达量。⑷Ishikawa细胞和KLE细胞的E2组的细胞相对增殖活性,均相对于Con组增高;LY294002组的细胞相对增殖活性,均相对于Con组降低;E2+LY294002组均较E2组降低。
结论:雌激素可上调子宫内膜癌细胞中Glo-ⅠmRNA和蛋白的表达,并促进子宫内膜癌细胞的增殖。抑制PI3K/AKT信号通路可下调子宫内膜癌细胞中Glo-ⅠmRNA和蛋白的表达,并下调子宫内膜癌细胞的增殖。雌激素可通过PI3K/AKT信号通路调控子宫内膜癌细胞中Glo-Ⅰ的表达。