论文部分内容阅读
目的：前列腺癌（prostate cancer，PC）是欧美等发达国家和地区男性中最常见的泌尿系统恶性肿瘤。近年来在我国其发病率也呈增长趋势。前列腺癌的治疗包括根治性前列腺切除术、内分泌治疗、化疗等综合治疗方案。由于前列腺癌是一种激素依赖性肿瘤，内分泌治疗是晚期前列腺癌的首选治疗方案。但是绝大多数前列腺癌在1-2年的治疗中位期后会逐渐转变为激素非依赖性，而对激素非依赖性前列腺癌目前尚无更多有效治疗方案，而化疗则是可以选择的方法之一。多西紫杉醇是目前临床上使用的一线化疗药物，具有广泛的抗肿瘤活性，但后期会逐渐出现化疗抵抗，使疗效变差。化疗抵抗是一个多因素参与的过程，而自噬是新近发现的化疗抵抗的重要机制之一。自噬也被称为Ⅱ型细胞程序性死亡，广泛存在于真核细胞中，参与细胞生长调控，维持细胞内环境稳定。有研究表明，自噬与肿瘤的发生发展有一定的关系。多西紫杉醇作为紫杉类药物，在胃癌，宫颈癌等实体肿瘤中有着广泛应用，也是前列腺癌的主要化疗药物，但关于多西紫杉醇是否可以诱导前列腺癌细胞发生自噬，目前尚未见文献报道。本实验拟通过体外细胞实验，观察多西紫杉醇是否诱导前列腺癌PC-3细胞产生自噬，并初步探讨其可能机制，为临床应用提供理论和实验依据。方法：不同浓度多西紫杉醇作用于前列腺癌PC-3细胞24h后，应用MTT法测定各组细胞的增殖率；透射电镜观察是否有自噬体的形成；免疫荧光和Western blot分别定性和定量检测自噬相关蛋白Ⅱ型微管相关蛋白轻链3蛋白(microtubule-associated protein1light chain3typeⅡ，LC3-Ⅱ)，底物蛋白(sequestosome1/SQSTM1，P62)表达水平，RT-PCR检测自噬相关基因Beclin-1mRNA。结果：MTT结果显示多西紫杉醇能有效抑制PC-3细胞增殖(F=58.684,P=0.000)；10-6mol/L多西紫杉醇处理PC-3细胞24h可诱导其发生明显的自噬，透射电镜观察到自噬体双层膜结构的形成。免疫荧光和Western blot结果显示多西紫杉醇处理PC-3细胞后P62表达降低(P=0.003、P=0.000、P=0.000)，LC3-Ⅱ表达增强(P=0.002、P=0.000、P=0.000)，RT-PCR结果显示多西紫杉醇处理PC-3细胞后可引起细胞Beclin-1mRNA水平的上调（P=0.000、P=0.000、P=0.000）。结论：本实验证实多西紫杉醇能有效抑制前列腺癌PC-3细胞的增殖并诱导其发生自噬，其作用机制可能与上调Beclin-1的mRNA水平有关。