【摘 要】
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背景:糖尿病所导致的溃疡属难愈性溃疡,是最常见的糖尿病并发症之一,常因为糖尿病微血管病变与神经病变所导致。随着组织工程技术的发展,研发自体皮肤替代用的工程支架成为一大热点,壳聚糖（Chitosan,CS）和胶原（Collagen,COL）类支架是一大热门。二者单独使用作为支架材料时,均因某些方面不足而限制了其实际中的应用,黄芪多糖（Astragalus polysaccharides,APS）可以
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背景:糖尿病所导致的溃疡属难愈性溃疡,是最常见的糖尿病并发症之一,常因为糖尿病微血管病变与神经病变所导致。随着组织工程技术的发展,研发自体皮肤替代用的工程支架成为一大热点,壳聚糖（Chitosan,CS）和胶原（Collagen,COL）类支架是一大热门。二者单独使用作为支架材料时,均因某些方面不足而限制了其实际中的应用,黄芪多糖（Astragalus polysaccharides,APS）可以通过促进创面和创周的血管新生,对糖尿病所导致的血管并发症有着明确的治疗效果。因此,本研究使用冷冻干燥法制成APS-CS/COL支架。将APS负载于CS/COL复合支架材料中。目的:对合成材料进行表征,并将其置于糖尿病大鼠创面上,通过不同方式观察在糖尿病大鼠创面愈合过程中APS-CS/COL支架对愈合进程的影响。方法:1.APS-CS/COL与CS/COL支架的制作:以低浓度（0.2 mol/L）乙酸溶液作为溶剂配制20 g/L壳聚糖溶液和3.55 g/L I型胶原溶液。按照黄芪多糖与胶原w/w=1:1称取黄芪多糖溶解于胶原溶液中。配制含有50 mmol/LMES（2-吗啉乙烷磺酸）、50 mmol/L NHS、50 mmol/LEDC的混合溶液用以交联APS-CS/COL。以Ⅰ型胶原溶液体积为标准,按照体积比3:7取适量壳聚糖溶液加入,将二者充分混合并加入适量交联剂,室温下交联6 h。交联完成后注磨,静置后置于零下20度冻等待其充分冷冻固化,随后不间断冷冻干燥12 h。不加入黄芪多糖但其余方法一样,制成CS/COL支架。2:APS-CS/COL与CS/COL支架对糖尿病大鼠创面愈合进程作用观察:将APS-CS/COL与CS/COL分别用于糖尿病皮肤缺损模型大鼠的创面修复,分别记为CS/COL组和APS-CS/COL组,每组15只,以不使用组织工程支架进行创面修复的15只糖尿病皮肤缺损模型大鼠为对照组。术后第7、14、21天,肉眼观察创面部位的大体情况,并使用Image J软件计算创面愈合率;取大鼠创面新生组织,HE染色后在显微镜下观察大鼠再生皮肤组织形态。结果:术后第7天,对照组和CS/COL组大鼠创面可观察到明显的炎症现象,镜下见少量成纤维细胞;APS-CS/COL组大鼠创面周围未见明显的炎症现象,创面中心处可见少量肉芽组织新生,镜下见较多成纤维细胞,可观察到明显的微血管形成及组织愈合迹象。术后第14天,对照组和CS/COL组大鼠创面部位有结痂存在,存在炎症反应且创面面积较大,镜下见真皮层有大量纤维细胞和胶原纤维;APS-CS/COL组创面愈合进程较快,圆心处见小范围未愈,镜下见新生真皮层中有少量成纤维细胞和大量紧致的胶原纤维,出现了处于分化阶段的皮肤附属器。术后第21天,对照组和CS/COL组大鼠创面自圆周向内见少量上皮生长,大多被肉芽组织充填,新生白色毛发稀疏,镜下见新生皮肤成纤维细胞数量仍然较多,表皮层分化不完全且较厚,可观察到新生血管、细胞附属器;APS-CS/COL组创面被肉芽组织充填,原有创面上大部分已被上皮取代,并可见较多白色新生毛发,镜下见创面新生皮肤组织结构和正常组织相似,表皮、真皮以及新生血管、细胞附属器等结构均完全形成。APS-CS/COL组大鼠术后第7、14、21天创面愈合率均高于CS/COL组和对照组（P＜0.05）。结论:APS-CS/COL组织工程支架可显著促进糖尿病大鼠皮肤缺损创面的修复进程。
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