猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征由病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染引起的,以妊娠母猪流产、死产、弱仔等繁殖障碍、仔猪呼吸困难、高死亡率及育肥猪呼吸道症状为主要特征,部分发病猪临床表现为耳部皮肤发绀,俗称“蓝耳病”。自2006年6月开始,在我国江西、湖南、湖北、安徽等省部分地区猪群中暴发了以持续高热、呼吸困难、皮肤发绀及母猪繁殖障碍、高发病率和死亡率为主要特征的重大疫情,临床上称之为“猪高热综合征”,给养猪业造成了极其巨大的经济损失。病原学研究表明,引起该病的主要病原体为高致病性PRRSV变异毒株。对高致病性PRRSV变异毒株的病原学诊断目前主要依靠RT-PCR技术,由于该方法需要较好的实验设备,加之检测费用高,无法在临床上大规模推广应用。本研究以临床“高热综合征”病例中分离到的高致病性PRRSV-HBR变异株接种健康仔猪制备抗血清,采用硫酸铵盐析法提取血清中免疫球蛋白(IgG),并用异硫氰酸荧光素(FITC)对IgG进行荧光标记,通过优化反应条件,建立一种用于检测病毒感染单层细胞及动物脏器组织切片中PRRSV抗原的直接免疫荧光(DIFA)诊断方法。应用该方法检测PRRSV感染MARC-145细胞增殖动力学的结果表明,接种后16h抗原阳性细胞开始出现,于60h～72h达到病毒增殖高峰,96h后感染细胞崩解。对PRRSV人工感染猪组织脏器抗原分布的检测结果显示,腹股沟淋巴结、空肠、睾丸、脾脏、下颌淋巴结、肠系膜淋巴结和扁桃体的抗原阳性检测率较高;对来源于山东、内蒙古、吉林、黑龙江等地10个猪场的38份临床病料的PRRSV平均阳性检出率为63.2%(24/38)。该方法具有特异性强、敏感性和重复性好等特点,与RT-PCR检测结果符合率为96.3%,对几种已知猪病毒抗原无交叉反应,标记的荧光抗体于4℃保存6个月稳定。本研究为猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的临床诊断提供了一种快速、敏感、特异、有效的检测手段。