贵阳地区禽白血病血清学调查与病原核酸检测

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[目的]:  通过了解贵阳地区禽白血病(Avianleucosis,AL)病原体的血清学、发病类型和病原类群情况,为贵阳地区禽白血病的预防与控制提供科学依据。  [方法]:  (1)采用ELISA检测试剂盒对采自贵阳地区不同养鸡场鸡血清样本进行禽白血病抗体检测,以了解贵阳地区禽白血病的流行情况。  (2)观察记录贵阳地区禽白血病病例的大体组织病变,并收集不同病例的组织样本进行H.E染色和病理组织学观察,以明确贵阳地区禽白血病类型。  (3)针对禽白血病病毒群特异性保守序列P27基因设计引物,对采集自13个养鸡场96份肝组织样本进行PCR检测,并随机选取2个PCR产物进行克隆测序分析。  (4)针对禽白血病病毒LTR序列和gp85基因设计引物,对经群特异性引物扩增为阳性的组织病料样本进行PCR检测,以明确贵阳地区存在的禽白血病病毒亚群。  [结果]:  (1)本研究共采集贵阳地区13个养鸡场15个鸡群共计481份鸡血清样本,检测结果显示鸡群ALV抗体阳性率为11.43%(55/481),其中有9个鸡群172份血清样本检出A或B亚群病毒抗体,抗体阳性率为18.60%(32/172);有13个鸡群309份血清样本检出J亚群病毒抗体,阳性率为7.44%(23/309)。  (2)经大体病理学和组织病理学观察证实,在发生禽白血病的7例疑似病例鸡群中,有3例为J亚群病毒引起的骨髓细胞瘤型白血病,2例为A亚群病毒引起的血管瘤型白血病,另2例为A亚群病毒引起的淋巴细胞性白血病。  (3)采用群特异性引物对采自13个鸡场96份鸡肝脏病料样本进行PCR检测,结果禽白血病病毒核酸的检出率为78.12%(75/96);随机选取2份PCR产物进行克隆测序分析,两者间同源性为98.5%,与SD0501和NX0101株相应片段同源性为97.6%与99.2%。  (4)采用LTR引物对75份经群特异性引物扩增为阳性的鸡肝脏病料样本进行外源性禽白血病病毒的检测,结果检出率为86.67%(65/75);随机选取4份PCR产物进行克隆测序分析,测序结果与与ALV-J、A、B、C、D和E亚群参考毒株相应序列的同源性分别为96.2~97.2%、88.3~90.1%、88.7~90.6%、87.1~89.1%、86.2~88.7%和56.7~57.3%。  (5)采用gp85引物对外源性禽白血病病毒感染病料样本进行检测,结果发现A亚群禽白血病病毒的感染率为56.92%(37/65),J亚群禽白血病病毒的感染率占36.92%(24/65),其中两者混合感染的检出率为3.07%(2/65)。  [结论]:  (1)贵阳地区部分养鸡场已存在禽白血病感染,包括A和J两个亚群禽白血病病毒。  (2)在贵阳地区感染的禽白血病病例中,存在淋巴细胞型禽白血病、骨髓细胞瘤型禽白血病和血管瘤型禽白血病三大类型。  (3)在贵阳地区发生的禽白血病病例中,既有A亚群或J亚群禽白血病病毒单独感染,也有A亚群和J亚群禽白血病病毒混合感染。
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