Raoultella ornithinolytica 160-1产生物絮凝剂的特性及其发酵优化

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通过16S r DNA测序、生理生化试验和MALDI-TOF MS分析,分离并鉴定了一株能产生高效的生物絮凝剂菌株Raoultella ornithinolytica160-1。Raoultella ornithinolytica160-1经过24 h培养后分泌胞外多糖聚合物(EPS-160),用乙醇在4℃条件下沉淀提取得到多糖粗品,通过透析袋去除离子和残余的培养基成分,进行进一步纯化得到2.76g/L多糖纯品。测试纯化冻干后的多糖纯品絮凝活性并用不同方法检测多糖结构和组成。当Al3+和Fe3+存在时,EPS-160能絮凝高岭土。在Al3+的辅助下,EPS-160的絮凝效率更高。在Al3+浓度为0.08mg/m L、EPS-160浓度为43.2mg/L时,多糖絮凝剂获得最高的絮凝效率,最高效率为97.94%。EPS-160能在1至13的p H范围和40至100℃温度范围内保存,并且能在p H在3~10和20~100℃的环境中保证高絮凝效率。实验化学分析结果显示,EPS-160主要由蛋白质(5.7%)和多糖(80.3%)组成。高效液相色谱测得多糖各组分中葡萄糖,鼠李糖和甘露糖的摩尔比为3.1:1:2.4。加入最佳浓度的Al3+和絮凝剂后,高岭土溶液发生明显絮凝,电位由-29.2 m V改变为-1.94 m V,发生明显的絮凝现象,高岭土絮凝迅速形成片状絮凝物沉淀到底部。红外光谱的结果表明EPS-160中存在羟基,羧基和甲氧基等功能基团。凝胶渗透色谱法测得多糖有三类分子量不同的成分,其分子量分别为1.72×103,1.12×104和1.17×106。Zeta电位和IR的实验结果表明电荷中和和桥接是EPS-160主要的絮凝机理。本研究探索了R.ornithinolytica160-1的发酵条件,确定在150rpm、25℃条件下发酵24h,可以最快获得高絮凝活性的多糖絮凝剂,并通过响应面优化R.ornithinolytica160-1发酵生产,在蔗糖,(NH4)2SO4和Mg SO4.7H2O的浓度分别为66.41g/L,12.84g/L和0.75g/L时,获得EPS-160的最大产量10.01g/L。在淀粉废水中发酵培养56h后,Raoultellao rnithinolytica160-1的发酵液絮凝效率为86.79%,说明R.ornithinolytica160-1可以应用于处理农作物生产废水,低成本发酵生产絮凝剂。基于高絮凝效率,p H耐受性和热稳定性,絮凝剂EPS-160在工业应用中显示出巨大的潜力。
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