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本文通过研究热应激蛋鸡血清总蛋白、钾、ATP酶的动态变化,肾脏组织形态改变,抗氧化性能及HSP70表达变化情况,探索中药对热应激蛋鸡肾功能的影响及作用机制研究,为抗蛋鸡热应激中药的研究提供实验数据与理论依据。
试验选用350只60周龄健康的海兰白蛋鸡,随机分成7个处理组,每组50只鸡。试验1～6组为热应激组,第7组为常温对照组,试验1～4组日粮中分别添加1％中药复方1、1%中药复方2、1%中药复方3、1%紫锥菊,试验5组日粮中添加0.1%电解多维,试验6组为高温对照组。在试验第14、28、42、56d分别取样4次,每组随机取5只鸡,翅静脉采血,检测血清指标:TP、K、Na+K+ATP酶;在试验第14、28、42、56d每组分别取5只鸡,对肾脏组织抗氧化能力、热休克蛋白表达及热休克蛋白定位进行研究。
1.生化指标测定结果显示,热应激状态下蛋鸡血清中TP含量下降,钾离子浓度上升,同时肾脏Na+K+ATP酶和钾浓度下降。中药复方和紫锥菊均可提高血清总蛋白含量、蛋鸡肾脏Na+K+ATP酶活性,肾脏总蛋白、钾含量。病理组织学检查结果显示,高温对照组蛋鸡肾脏出现。肾小球毛细血管发生纤维素样坏死,以及大量肾小管上皮细胞肿胀,变性、坏死等病理变化。其它用药热应激试验组蛋鸡肾脏也出现病理变化,主要出现肾小管上皮细胞肿胀使肾小管管腔变窄,肾小球体积增大等病理变化,但其病变程度比高温对照组轻。试验结果表明,复方1、2、3、紫锥菊和电解多维可以降低蛋鸡热应激反应,减轻肾脏应激性损伤,保护肾脏功能。
2.抗氧化性能检测结果显示,热应激导致蛋鸡肾脏MDA含量显著升高(P＜0.05),SOD、GSH-PX和CAT活性明显下降。各中药复方、紫锥菊和电解多维能够明显提高热应激蛋鸡肾脏抗氧化性能,减轻肾脏组织细胞自由基损伤程度,其中复方2、3的作用较稳定,紫锥菊起效较慢但作用最强。
3.试验结果表明,在整个试验期各热应激组蛋鸡肾脏HSP70表达量均增加,但各用药组HSP70升高的幅度均低于高温对照组,其中紫锥菊组下降的幅度最大。提示复方1、2、3、紫锥菊和电解多维能够减轻肾脏应激性损伤,减少肾脏细胞内变性蛋白含量,从而降低了HSP70水平表达,其中紫锥菊效果最好。
4.免疫组化试验结果表明,各热应激试验组HSP70阳性表达均增强,且主要分布于肾小管上皮细胞中,只有复方1、3和紫锥菊组蛋鸡的肾小球内皮细胞出现HSP70弱阳性表达,提示肾小管是肾脏热应激损伤的主要部位,HSP70表达增加可能与组织细胞损伤后功能恢复有关。另外,中药复方1、2、3和紫锥菊可能通过促进HSP70迅速向核内转移,使HSP70均匀分布于整个细胞中。且复方1、3和紫锥菊可诱导。肾小球内皮细胞表达HSP70,而复方2对肾小管内的HSP70与肾小球中HSP70表达影响作用不明显。