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目的:在糖尿病视网膜病变的动物模型上将VEGF ASODN (Vascular Endothelial Growth Factor Antisepses Oligodeoxynucleotides)导入SD(Sprague Dawley )大鼠相应的眼球玻璃体内转染视网膜细胞,利用免疫组化分析其作用效果,以揭示VEGF ASODN下调视网膜VEGF表达、抑制新生血管形成。使用具有较高分子量的荧光素对SD大鼠视网膜进行左心室灌注造影,观察VEGF ASODN对糖尿病视网膜病变大鼠新生血管通透性的抑制,减少新生血管渗出的作用。方法:1、设计二个互补于VEGF mRNA的反义片段,作用于VEGF第1、2外显子连接区(ODN)。寡核苷酸(Oligodeoxynucleotides ODN)的碱基序列为:ASODN:5’-TCCAGGGACCACTTGGCATGGTGGA-3’。其合成由上海生工生物公司(厂商)负责。选鼠龄2个月,体重200g健康雄性SD大鼠55只(南大医学院实验动物中心提供)。适应性喂养两天后,取15只健康大鼠正常喂养,为非糖尿病视网膜病变大鼠(对照组C),另外40只大鼠,禁食12小时后以60mg/kg一次性腹腔注射2%STZ(Streptozotocin链尿佐菌素)溶液,临用前用0.5 mmol/L的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(pH 4.5)配制。注射后48 h采尾血测血糖及尿糖,将血糖浓度大于16.7 mmol/L、尿糖阳性的大鼠定为糖尿病模型,共30只,将糖尿病大鼠分别饲养3个月。实验动物模型建立喂养3个月即给予随机分2组(治疗组A、对照组B, n=15) ,将100umol/LVEGF ASODN(0.1 lul/10g体重大鼠)注射于治疗组A动物相应的眼球玻璃体内,转染视网膜细胞。对照组B注射相等量的生理盐水于眼球玻璃体内。注射三天后重复上述处理一次,摘除眼球,对各组大鼠视网膜VEGF免疫组化染色进行比较。2、分别在各组取5只大鼠进行心脏灌注高分子量的荧光素后,迅速摘除眼球并固定,在显微镜下游离视网膜并铺片,在荧光显微镜中观察视网膜血管的分布与形态。结果:1、注射VEGF ASODN治疗组A的大鼠视网膜VEGF免疫组化染色与对照组B大鼠视网膜VEGF免疫组化染色组相比,前者VEGF表达较弱,新生血管减少。2、在荧光显微镜下的观察,与对照组B相比,注射VEGF ASODN治疗组A大鼠的视网膜血管形态较完整,走形较清楚,减少出血和渗出。结论:VEGF ASODN对STZ诱导的糖尿病视网膜病变大鼠VEGF的表达具有一定的抑制作用,减少糖尿病视网膜病变的新生血管形成,减轻糖尿病视网膜病变新生血管的渗出。