不同病毒载体介导hBMP-7基因修饰的仿生型组织工程骨修复骨缺损的对比研究

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目的: 应用人骨形成蛋白7(human bone morphogenetic protein-7,hBMP-7)基因分别重组2型腺相关病毒(Adeno-associated virus serotype 2,AAV2)和35型腺病毒(adenovirus’S containing fibers derived from B-group serotype 35,Ad5/F35),在体外转染兔骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)后与仿生型生物玻璃/胶原蛋白/磷脂酰丝氨酸/透明质酸(bioactive glass,collagen,hyaluronicacid and phosphatidylserine,BG-COL-HYA-PS)复合支架材料复合,植入兔桡骨缺损模型中,观察其在体内成骨的能力,比较哪种病毒载体更适合介导hBMP-7基因应用于骨缺损的治疗。 结论: 1.成功构建了hBMP-7基因重组2型腺相关病毒、35型腺病毒载体;成功在体外培养出表达均一、高纯度的兔MSCs。 2.rAAV2-EGFP和rAd5/F35-EGFP在体外均可高效转染兔MSCs。前者在兔MSCs中表达的荧光强度与维持的时间比后者更强和更长。 3.rAAV2-hBMP-7与rAd5/F35-hBMP-7在体外均可促进兔MSCs向成骨细胞定向分化。前者在碱性磷酸酶、钙结节和骨钙素等成骨细胞表型各项指标优于后者。 4.rAAV2-hBMP-7与rAd5/F35-hBMP-7转染的兔MSCs与仿生型BG.COL-HYA-PS复合后植入SCID鼠后肢肌袋均能异位成骨,但前者成骨的时间早于后者。而rAAV2-EGFP和rAd5/F35-EGFP转染的兔MSCs与BG-COL-HYA-PS的复合体在早期未见明确成骨。 5.骨缺损模型畔rAAV2-hBMP-7转染的兔MSCs与仿生型复合支架BG-COL-HYA-PS组成的复合体修复的桡骨早期在抗折弯能力上强于rAd5/F35-hBMP-7组成的复合体,但均不如正常的桡骨。比较rAd5/F35-hBMP-7修饰的组织工程骨,rAAV2-hBMP-7修饰的组织工程骨是更为理想的骨缺损修复材料。
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