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目的建立RT-PCR、real-time quantitative PCR和巢式PCR(nested RT-PCR)检测Nucleostemin基因表达的方法,研究NS基因的表达与消化道肿瘤的关系,为消化道肿瘤的诊断寻找新的指标。方法培养肿瘤细胞株(SGC、A549、D95、SW480、U937、PC3),收集胃癌、结肠癌、直肠癌患者收集癌组织和对应的癌旁组织以及外周血,采集16位胃癌患者癌旁淋巴结,提取各种细胞株、组织、淋巴结和外周血单个核细胞中的总RNA,采用RT-PCR和real-time quantitative PCR技术研究肿瘤细胞株和肿瘤癌组织中Nucleostemin基因表达水平;采用RT-PCR和巢式PCR(nestedRT-PCR)技术检测消化道肿瘤患者外周血中Nucleostemin基因的表达平。结果PC3、SW480、A549、SGC、D95、U937细胞株都表达NS基因,SGC中表达最强,其次是U937和SW480,hBMMSC表达最弱。采用RT-PCR技术检测组织中NS基因表达:胃癌组织阳性率90%(27/30),胃癌旁组织阳性率3.3%(1/30),胃癌旁淋巴结阳性率为87.5%(14/16),患者淋巴结阳性结果和相应患者癌组织阳性结果一致;6例直肠癌患者中有5例患者癌组织NS基因表达阳性,但癌旁组织表达阴性,有1例癌组织和癌旁组织都为阴性。7例结肠癌患者中有7例患者癌组织为阳性,癌旁组织为阴性。Real-Time PCR检测胃癌、结肠癌、直肠癌组织中NS基因的表达:胃癌患者,直肠癌患者,结肠癌患者癌组织平均表达量高于癌旁组织,胃癌患者癌旁淋巴结中NS基因表达高于癌旁组织;在胃癌、结肠癌、直肠癌组织中,NS基因的表达与病理分期无显著相关性,但与分化程度相关,分化程度越低,表达越高。采用RT-PCR方法在肿瘤患者外周血中无法检测到消化道肿瘤患者外周血单个核细胞中NS基因表达。巢式PCR检测NS基因在外周血单个核细胞中的表达:健康体检者NS基因为阴性;胃癌患者手术前NS基因阳性率为60%(18/30),手术1周后阳性率为43.3%(13/30),结肠癌患者手术前NS基因阳性率为71.4%(5/7),手术1周后阳性率也为71.4%(5/7),直肠癌患者手术前NS基因阳性率为83.3%(5/6),手术1周后阳性率为33.3%(2/6);手术1周后NS基因阳性患者预后较差。结论NS基因可能与胃癌、结肠癌、直肠癌等实体瘤的发生发展有着紧密的联系,这为肿瘤的基因治疗和基因诊断提供了一个新的途径和指标。在胃癌、结肠癌和直肠癌患者手术前外周血单个核细胞中NS基因表达阳性率较高,而在健康对照组外周血单个核细胞中未见表达,手术1周后为外周血单个核细胞中NS基因呈阳性的患者预后较差,这个结果提示,在肿瘤患者外周血单个核细胞中检测NS基因可能有助于消化道肿瘤的诊断和判断预后。